寡肽接头分子生物催化合成的研究

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本文开展了在体外用法尼基转移酶催化人工合成的寡肽与法尼基焦磷酸(FPP)的合成研究,即合成我们需要的寡肽接头分子。接头分子是一个连接酵母细胞和抗体的一个桥梁,合成出的接头分子是酵母细胞流式阵列的一个重要元件,为以后的酵母流式阵列的构建打下基础。这项研究内容包括对需要的寡肽的合成设计、反应体系的优化及寡肽接头分子的分离。在寡肽的合成设计过程中,主要考虑法尼基转移酶对催化的底物的结构要求、流式阵列中酵母细胞必须具备的结合抗体的能力要求(寡肽需含有游离的羧基)以及在制作寡肽标准曲线中便于检测的原则来设计。对反应体系的优化实验中,主要进行了两部分实验:一是单因素实验部分,首先确定温度、pH对法尼基转移酶活性的影响,确定适宜的反应温度和反应体系的pH;另外一部分是通过做三因素三水平正交试验,在寡肽浓度饱和的条件下研究另一个底物FPP浓度、加入的法尼基转移酶的浓度、反应时间对合成我们需要的寡肽接头分子的量的影响,以确定最优反应体系。合成出寡肽接头分子后,通过凝胶层析法除去反应体系中的法尼基转移酶,得到需要的寡肽接头分子,通过真空冷冻干燥,低温保存待用。
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