论文部分内容阅读
目的:观察鞘内注射甲氨蝶呤对胫骨癌痛大鼠机械痛敏的影响,并观察其对脊髓小胶质细胞的活化以及促炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)分泌的影响,初步探讨其可能的脊髓机制。 方法:实验分两部分完成,第一部分实验:将48只雌性SD大鼠随机均分为6组(n=8):假手术+人工脑脊液组(SA组),假手术+甲氨蝶呤200μg组(SM组)骨癌痛+人工脑脊液组(CA组),骨癌痛+甲氨蝶呤50μg组(CM50组),骨癌痛+甲氨蝶呤100μg组(CM100组),骨癌痛+甲氨蝶呤200μg组(CM200组)。模型组胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞,假手术组胫骨骨髓腔内注射等体积生理盐水,各组于造模前,造模后1、3、5、7d测定机械性缩足阈值(MWT),第7天测定MWT后鞘内注射相应剂量甲氨蝶呤或等体积人工脑脊液,并于给药后2、4、8、24h与给药后2、3、5、7d测定MWT,最后处死大鼠留取手术侧胫骨,HE染色观察胫骨内肿瘤细胞生长情况。第二部分实验:将30只雌性SD大鼠随机均分为3组(n=10):假手术+人工脑脊液组(SA11组),骨癌痛+人工脑脊液组(CA11组),骨癌痛+甲氨蝶呤100μg组(CM11组)。各组于造模前,造模后1、3、5、7d测定机械性缩足阈值(MWT),第7天测定MWT后鞘内注射甲氨蝶呤100μg或等体积人工脑脊液,并于给药后2、4、8、24h测定MWT;随后分别行灌注取材和新鲜取材,免疫荧光观察脊髓小胶质细胞的活化情况,Elisa检测脊髓TNF-α和IL-1β含量的变化。 结果:(1)机械痛行为学:胫骨骨髓腔内注射同源乳腺癌细胞后大鼠MWT逐渐降低,至造模后7d时较术前明显减低(P<0.05);鞘内注射甲氨蝶呤后MWT逐渐增加,其中CM100组与CM200组在给药后4h较给药前增加(P<0.05),至24h时达最大效应(P<0.05),持续至给药后5d时恢复到给药前水平(P>0.05),但仍高于CA组(P<0.05)。(2)胫骨组织学:CA组与CM200组组织学检测发现胫骨髓腔内充满了肿瘤细胞,骨结构改变明显,而SA组未见骨结构改变。(3)免疫荧光染色:CA11组Iba-1染色的小胶质细胞几乎遍布整个脊髓背角灰质,胞体肥大,染色加深,小胶质细胞计数显示CA11组较SA11组明显增加(P<0.05),而鞘内注射甲氨蝶呤后CM11组脊髓背角小胶质细胞计数较CA11组明显减少(P<0.05)。(4)Elisa:脊髓TNF-α和IL-1β的表达量在CA11组显著增高(与SA11组比较,(P<0.05);而CM11组与CA11组比较则显著降低(P<0.05)。 结论:鞘内注射甲氨蝶呤可以减轻胫骨癌痛大鼠的机械痛敏,其脊髓机制可能与抑制脊髓小胶质细胞的激活及促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌有关。