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第一部分大鼠M1巨噬细胞注射椎间盘损伤模型构建目的:利用21G针头尾椎穿刺模型做对比研究,探讨M1巨噬细胞椎间盘注射致椎间盘退化模型的可行性。方法:1.以4周龄SPF级SD大鼠为骨髓提取对象,应用含LPS及IFN-γ的培养基扩增诱导大鼠骨髓来源的M1巨噬细胞,将得到的M1巨噬细胞行real-time RT-PCR检测炎性细胞因子TNF-α及IL-1b基因的表达。2.选取大鼠Co6-Co9尾椎间盘分别行21G针头穿刺、空白对照及M1巨噬细胞注射处理。3.处理后8周、12周,对大鼠尾椎间盘进行MRI及CT检查,应用软件统计测量椎间盘退变程度及椎间盘高度。12周处死大鼠,对大鼠椎间盘实行HE和番红固绿染色及免疫组化分析。结果:1.在显微镜下观察,骨髓细胞接种后细胞为圆形漂浮细胞,并随着培养时间的延长逐渐贴壁。收集未贴壁细胞在含M-CSF培养基培养48小时后,大部分细胞已经贴壁,为M0巨噬细胞,经诱导M1巨噬细胞成熟后,细胞形态多样,有伪足和凸起,利用real-time RT-PCR检测发现IL-1b及TNF-αm RNA较对照组明显增加,其中IL-1b m RNA M1组是M0组72.3±13.9倍,TNF-αm RNA M1组是M0组7.3±0.5倍,表明M1巨噬细胞培养成功;2.注射M1巨噬细胞后8周及12周椎间盘信号明显减低,减低程度大于穿刺造模组。注射M1巨噬细胞后可使得椎间高度明显下降,且终板软骨遭到侵袭,出现终板破坏;3.组织学染色可见对照组椎间盘组织结构整齐,髓核及纤维环结构清晰。而穿刺造模组椎间盘纤维环断裂、髓核细胞减少,终板边缘不规则。注射组则间盘内容物进一步下降,结构错乱明显,终板严重不规则。HE染色评分对照组4.15±1.15、穿刺造模组8.73±1.40、M1巨噬细胞注射组11.52±1.22,番红固绿染色评分对照组4.79±1.19、穿刺造模组11.31±1.38、M1巨噬细胞注射组11.78±0.93;4.免疫组织化学结果显示,穿刺造模组蛋白多糖阳性表达率显著低于对照组,P<0.05,而M1巨噬细胞注射组阳性表达率显著低于穿刺造模组和对照组,P<0.05;II型胶原表达穿刺造模组阳性表达率显著低于对照组,P<0.05,M1巨噬细胞注射组阳性表达率显著低于穿刺造模组和对照组,P<0.05。小结:1.21G针头椎间盘穿刺及M1巨噬细胞注射均可制造出椎间盘损伤模型,共同表现为核磁信号减低,椎间高度降低及细胞外基质成分丧失;2.M1巨噬细胞注射椎间盘损伤模型的可能机制与其分泌的炎症因子有关;3.M1巨噬细胞注射组较21G针头椎间盘穿刺组椎间盘损伤严重,是今后可以应用的重度椎间盘损伤模型。第二部分诱导多能干细胞(iPSC)对大鼠M1巨噬细胞注射所致椎间盘损伤的疗效观察目的:观察iPSC对大鼠M1巨噬细胞注射所致重型间盘损伤模型的治疗作用,并探求其作用机制。方法:1.以4周龄SPF级SD大鼠为骨髓提取对象,应用含LPS及IFN-γ的培养基诱导培养大鼠骨髓来源的M1巨噬细胞,将得到的M1巨噬细胞注射大鼠Co6-7及Co8-9尾椎间盘,制成尾椎间盘重型损伤模型。2.M1巨噬细胞注射造模后8周对实验大鼠Co6-7及Co8-9尾椎间盘分别行PBS注射对照处理及iPSC注射处理。3.iPSC注射治疗后8周及12周,对大鼠尾椎间盘进行MRI及CT检查,应用软件统计测量椎间盘退变程度及椎间盘高度。12周处死大鼠,对大鼠椎间盘实行HE和番红固绿染色及免疫组化分析。结果:1.iPSC注射结束后8周及12周Co6-7(退变组)椎间盘信号均较Co7-8(空白组)明显减低,椎间高度明显下降,且终板软骨遭到侵袭出现终板破坏;而Co8-9(穿刺+iPSC组)较退变组可见椎间高度有所提升,椎间盘信号明显增强,对椎间盘退变具有一定治疗作用。2.组织学染色可见对照组椎间盘组织结构整齐,髓核及纤维环结构清晰。而退变造模组椎间盘纤维环断裂,髓核及纤维环边界中断,髓核细胞减少,胞外基质凝结,终板边缘不规则。穿刺+iPSC组椎间盘结构较退变组髓核细胞增加,纤维环及髓核边界清晰,较退变组改善明显。HE染色评分空白组4.55±0.89、退变组7.18±0.98、穿刺+iPSC组5.17±0.70,穿刺+iPSC组评分显著低于退变组,P<0.05;番红固绿染色评分空白组4.4±1.17、退变组11.60±1.38、穿刺+iPSC组9.02±1.13,穿刺+iPSC组评分显著低于退变组,P<0.05。3.免疫组织化学结果显示,退变组蛋白多糖阳性表达率显著低于对照组,P<0.05,而穿刺+iPSC组阳性表达率低于对照组但显著高于退变组,P<0.05;退变组蛋白Ⅱ型胶原表达率显著低于对照组,P<0.05,而穿刺+iPSC组阳性表达率低于空白组但显著高于退变组,P<0.05;退变组的TGF-β表达率明显低于穿刺+iPSC组,P<0.05,穿刺+iPSC组TGF-β表达率低于空白组,P<0.05。小结:1.iPSC对M1巨噬细胞所致的间盘退化有一定的治疗作用,可以升高椎间盘信号强度及提升椎间盘高度,具有促进蛋白多糖及Ⅱ型胶原合成的作用;2.iPSC治疗M1巨噬细胞所致的间盘退化的作用机制可能与其增加椎间盘细胞的数量,促进细胞外基质的合成以及调节椎间盘退变相关TGF-β通路有关。第三部分脊髓型颈椎病患者前路混搭手术的预后不良因素研究目的:本研究旨在针对颈前路混搭手术治疗脊髓型颈椎病的预后不良危险因素的回顾性研究,并探讨术后颈椎后凸畸形进展的原因。方法:本研究纳入2011年6月至2017年6月就诊的86例进行性脊髓压迫及伴有局部后凸畸形且接受前路混合入路(ACDF+ACCF)的患者。通过日本骨科协会(JOA)评分和恢复率评估其临床预后。根据术后局部后凸的改善情况将患者分为两组,预后良好组和预后较差组。多元logistic回归用于评估危险因素。通过Mann-Whitney U检验,独立t检验和卡方检验比较术后和最后一次随访之间的局部后凸畸形的变化。结果:其中20例患者的术后恢复率低于50%,多元logistic回归分析结果显示:高龄、症状持续时间较长、T1倾斜角和局部后凸畸形矫正不良均与临床预后不良相关。术后局部后凸加重的危险因素有T1倾斜角、C2-7SVA、邻近节段退变(ASD)和移植物塌陷。小结:1.对于前路混搭手术而言,手术年龄,症状持续时间,T1倾斜角和局部后凸畸形是CSM和颈椎后凸畸形患者临床结局的危险因素。2.较小的T1倾斜角、较大的SVA可能与术后颈椎后凸畸形的进展有关,而后凸角度的恶化伴随着术后ASD发生率的增加以及移植物下陷的情况出现。