一、研究背景及目的瘢痕疙瘩是现代医学面临的难题之一,为了明确瘢痕疙瘩的病因,国内外许多学者从病理组织学、免疫学和遗传学等方面开展了一系列的基础研究,提出了许多如胶原合成与降解失衡、细胞因子、成纤维细胞凋亡障碍、免疫反应和遗传学等许多学说,但至今尚未阐明瘢痕疙瘩的发病机制,其重要的原因之一是大多研究集中在散发病例,很难获得符合遗传学研究的家系标本。瘢痕疙瘩具有一定的家族遗传倾向,Cosman等证实其家族性发生率约为3%,深色皮肤人种多发。瘢痕疙瘩的遗传模式有学者认为属于常染色体显性遗传,也有学者认为属于常染色体隐性遗传。2001年哈佛大学Marneros等对14个瘢痕疙瘩家系进行遗传学调查研究后发现,其遗传模式符合常染色体显性遗传伴外显不完全,且表现度存在差异。2004年,Marneros等通过对一个瘢痕疙瘩日本家系和一个非洲裔美国人家系进行微卫星标记全基因组扫描和连锁分析研究后发现,日本家系的瘢痕疙瘩易感基因与染色体2q23连锁,非洲裔美国人家系的瘢痕疙瘩易感基因与染色体7p11连锁,说明有可能瘢痕疙瘩易感基因存在遗传异质性。该研究首次提出了存在瘢痕疙瘩易感基因的遗传学证据,对进一步定位瘢痕疙瘩的易感基因具有重要的意义。由于瘢痕疙瘩的发病存在显著种族差异,目前尚不清楚中国人瘢痕疙瘩家系的易感基因位点是否与Marneros等的研究发现相一致。为此,课题组收集了两个中国汉族瘢痕疙瘩大家系进行STR连锁分析的研究。这两个家系规模大、发病人数多,能很好的满足研究遗传病对家系的要求,具有和Marneros进行研究的两个家系相类似,且具有很好的代表性。为进一步开展其易感基因的定位研究奠定了良好的基础。本课题组先前曾于染色体7p11及其周围选取微卫星标记位点,通过微卫星扫描及连锁分析来进一步确定中国汉族瘢痕疙瘩家系易感基因与染色体7p11是否存在连锁关系。通过STR连锁分析判断中国汉族瘢痕疙瘩家系与这些微卫星位点之间不存在连锁关系。因此本研究在先前研究的基础上,拟通过微卫星扫描及连锁分析对于两个中国汉族瘢痕疙瘩(keloid)家系的易感基因与2q23区域是否存在连锁关系进行了明确和验证。同时由于Fas介导的信号转导系统公认为是最重要的细胞凋亡通路。自1996年以来本课题组一直对散发病例中Fas基因进行系列研究。Fas基因位于染色体10q24.1上,是全长36kb的单拷贝基因。为了进一步确认Fas受体基因是否在瘢痕疙瘩家系样本存在突变,故本研究对Fas基因的9个外显子也进行了基因序列的分析。二、研究对象与方法1.采用微卫星扫描及连锁分析方法研究两个中国汉族4代keloid家系,选取两个家系中64名成员的外周静脉血标本,根据文献选择位于2q23区域及其周围的11个微卫星标记,2005年在上海基康公司应用多重聚合酶链式反应(mPCR)扩增产物片断,测定PCR产物片段,获得每个样本的基因分型。运用连锁分析软件LINKAGE(Ver.5.11)的MLINK程序计算每个标记位点的LOD值,根据两点间LOD值判断是否存在连锁关系。2.实验标本来自收集的A和B两个瘢痕疙瘩家系。2005年在上海基康公司采用聚合酶链反应及基因测序技术,分别以A家系两例患者的瘢痕疙瘩组织为研究对象,以其周围正常皮肤及外周静脉血作为自身对照。其配偶的外周静脉血作为正常对照,并以B家系中两例患者的外周静脉血作为不同家系之间的对照。检测10份样本中Fas基因外显子1-9的基因序列。三、结果1.在重组率θ=0～0.5时,这些微卫星标记的两点LOD值均小于1,不提示连锁关系存在。2.基因测序发现所检测的10个瘢痕疙瘩家系标本Fas基因的1-8外显子均未发现突变。3.两例瘢痕疙瘩组织标本均在第9外显子编码区的11 bp,53 bp两个位点上存在单个碱基的基因突变或多态性(SNP)改变。四、结论1.可以排除两个中国汉族瘢痕疙瘩家系易感基因位于染色体2p23上的可能性。瘢痕疙瘩易感基因可能存在遗传异质性。2.瘢痕疙瘩Fas基因外显子9区段的基因结构异常极有可能造成Fas蛋白的功能改变。从而有可能导致身体局部的瘢痕疙瘩的形成。