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肝素是Dag Mclean在1916年研究凝血机制时发现的一种酸性粘多糖。它是一种是由糖醛酸（L-艾杜糖醛酸IdoA；D-葡萄糖醛酸GlcA）和葡萄糖胺（α-D葡萄糖胺GlcN）组成的具有不同链长的多糖链混合物。到目前为止，还没有能够完全代替它的药品，仍是最重要的生化药物之一。肝素广泛分布在哺乳动物肝、肺、肠粘膜、心、肾、脾、胎盘、胸腺、肌肉和血液等组织中。2008年，从海外进入美国的肝素原料药和最终成品中发现人为添加的多硫酸软骨素（over-sulfated chondroitinsulfate，OSCS）。随着有关肝素产品的有害报导的不断增加，通过FDA、企业和研究机构的协作研究证实某些病人的过敏反应与在肝素中存在OSCS有关。因此，OSCS的检测成了肝素粗品质量控制重要指标之一。据国外文献报导核磁共振氢谱(1H-nuclear magnetic resonance，1H-NMR)从OSCS污染的肝素中可以检测到异于肝素的N-乙酰基甲基峰，通过检测这一特征峰可以判断肝素中是否含有OSCS污染物。另外，国外的研究团队对强阴离子交换高效液相色谱（strong anion exchange-highperformance liquid chromatography，SAX-HPLC）检测肝素中OSCS含量的方法进行了相关的研究。由于牛海绵状脑病以及其他动物病毒疾病的存在，猪来源的唯一性就成了确保肝素安全性的一条关键要求。本研究的主要工作如下：1.1H-NMR检测粗品肝素中OSCS调节pH除去粗品肝素中的蛋白质，以80%乙醇等体积沉淀肝素对粗品肝素进行了预处理；以400MHz、298K和64次扫描的条件检测粗品肝素的N-乙酰基甲基信号。经过多次试验均未检测到待测样品中存在的OSCS的N-乙酰基甲基峰信号，而DS（硫酸皮肤素）的N-乙酰基甲基峰信号总是伴随着肝素的信号出现。因此判定待检粗品肝素样品未受人为添加的OSCS的污染，并且含有大量的DS。通过添加适当的OSCS标准品至粗品肝素中，考察1H-NMR检测OSCS的检测限。当OSCS添加量为0.25%时信号响应微弱以至于难以与噪音分辨，所以确定该方法对OSCS的检测限为0.5%的添加量。2.SAX-HPLC检测粗品肝素中OSCS参照美国FDA文献的方法，在粗品肝素中添加适量的OSCS美国药典标准品确立OSCS的检测限。两种方法得到的结果与核磁共振的结果一致，添加0.25%OSCS美国药典标准品的粗品肝素中的OSCS特征峰很难辨别；因此，SAX-HPLC检测粗品肝素中OSCS的检测限为0.5%的添加量。美国FDA文献建立的方法所耗费的时间比中国药典2010年版要短，更具有实际采用的价值。3.实时荧光定量PCR检测粗品肝素中的反刍基因考察了2种引物和2种荧光定量PCR方法对于粗品肝素中反刍基因的扩增情况。2组引物均会引起猪DNA与反刍动物DNA产生交叉反应，该交叉反应对猪DNA和反刍DNA的鉴别不构成严重障碍。对猪、反刍的DNA检测限分别为1.16pg/μl、0.05pg/μl和0.116pg/μl、0.05pg/μl。荧光探针体系中的交叉反应效果较轻，特异性更好，对反刍动物DNA的检测限为0.05pg/μl。因此，在检测费用充裕的情况下，采用荧光探针法检测粗品肝素中的反刍基因更准确。