嗅鞘细胞移植对P2X7R介导大鼠三叉神经痛的作用研究

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目的:三叉神经痛(TN)是一种恼人的疼痛,在临床上,由于其发病机制复杂,缺乏有效的治疗方法,因此又被称为“不死的癌症”。嗅鞘细胞是中枢神经系统中终生俱有再生能力的细胞,为嗅神经元周期性换代提供重要的营养以及管道支持。本研究拟探讨嗅鞘细胞移植对P2X7R介导的三叉神经痛的治疗作用及P2X7R相关炎症因子表达变化之间的关系,为三叉神经痛的治疗提供理论基础及实验依据。方法:1.采用原代培养法对嗅鞘细胞进行培养,并对嗅鞘细胞原代培养物进行免疫荧光双标鉴定。2.制作眶下神经远端结扎模型(d ION-CCI)进行三叉神经痛模型建立。3.将大鼠随机分成四组:假手术组(SHAM)、慢性眶下神经结扎损伤组(d ION-CCI)、嗅鞘细胞移植组(d ION-CCI+OECs)、P2X7R抑制剂治疗组(d ION-CCI+BBG)。4.于术前和术后1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21天测定大鼠的面部机械痛敏阈值。5.使用透射电镜对建模21天后大鼠眶下神经髓鞘情况进行检测。6.采用免疫组织化学技术对建模大鼠三叉神经节(TG)中P2X7R、NF-κB p65、NLRP3、IL-1β、IL-18等因子表达水平变化进行检测。7.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)技术和免疫印迹(WB)技术检测大鼠三叉神经节(TG)内P2X7R、NF-κB p65、NLRP3、IL-1β、IL-18受体m RNA和蛋白水平的变化。结果:1.经免疫荧光双标鉴定,原代OECs培养物纯度在90%以上,符合后续细胞移植实验纯度要求。2.术后SHAM组面部机械疼痛阈值未产生明显变化。从第7天开始d ION-CCI组大鼠面部疼痛阈值较SHAM组剧烈降低(P<0.01),且始终保持在较低水平。从第11天第二次注射OECs开始d ION-CCI+OECs组较单纯d ION-CCI组疼痛阈值明显上升(p<0.01),且连续腹腔注射BBG生理盐水溶液后,d ION-CCI+BBG组行为学也较单纯d ION-CCI组有明显改善(p<0.01)。3.术后21天电镜结果显示SHAM组髓鞘结构完整,有髓神经纤维排列有序。单纯d ION-CCI组大鼠眶下神经髓鞘结构明显破坏,神经纤维和髓鞘边界明显分离,髓鞘中存在大量崩解区域。d ION-CCI+OECs组可见髓鞘结构较为完整,神经纤维与髓鞘结构保持较为紧密。有髓神经纤维形状存在部分改变。d ION-CCI+BBG组大鼠髓鞘存在一定程度的变性崩解,部分髓鞘与神经纤维分离,有髓神经纤维变形。4.术后21天TG免疫组织化学结果显示:单纯d ION-CCI组TG中P2X7R、NF-κB p65、NLRP3、IL-1β、IL-18表达较SHAM组均有不同程度上调(p<0.05),d ION-CCI+OECs组与d ION-CCI+BBG组TG中P2X7R、NF-κB p65、NLRP3、IL-1β、IL-18因子表达水平较单纯d ION-CCI组有明显下降(p<0.05)。5.实时荧光定量PCR检测结果显示:单纯d ION-CCI组大鼠TG中P2X7R、NF-κB p65、NLRP3、IL-1β、IL-18 m RNA表达水平较SHAM组均有不同程度上调(p<0.05)。d ION-CCI+OECs组和d ION-CCI+BBG组大鼠TG中P2X7R、NF-κB p65、NLRP3、IL-1β、IL-18 m RNA较单纯d ION-CCI组均有不同程度下降(p<0.05)。6.Western Blot实验结果显示:单纯d ION-CCI组大鼠TG中P2X7R、NF-κB p65、NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达水平较SHAM组有不同程度上调(p<0.05)。d ION-CCI+OECs组和d ION-CCI+BBG组大鼠TG中P2X7R、NF-κB p65、NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达水平较单纯d ION-CCI组有不同程度下降(p<0.05)。结论:嗅鞘细胞移植能够缓解P2X7R介导的三叉神经痛症状,并能降低三叉神经节中P2X7R相关炎症因子的表达,减轻三叉神经节神经炎症反应。
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