环状RNA CircMYO10通过海绵作用吸附miR-370-3p来上调RUVBL1从而促进骨肉瘤进展

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目的:此前已有文献报道环状RNA hsacircRNA103801(在circBase中的命名为hsacirc0071989,按照命名规则命名为circMYO10)在骨肉瘤细胞系中显著升高,而hsacirc0071989在骨肉瘤中的作用及其机制尚未见文献报道。本研究旨在研究hsacirc0071989在骨肉瘤中的作用及其发挥作用的机制。方法:该研究首先通过荧光定量PCR以及荧光原位杂交技术检测了circMYO10、miR-370-3p、RUVBL1在骨肉瘤细胞系、10对人软骨瘤(n=10)和骨肉瘤(n=10)样本中的表达含量。通过流式细胞仪检测细胞周期分布,划痕实验、Transwell迁移实验,细胞增殖实验,克隆形成实验等方法研究了CircMYO10/miR-370-3p/RUVBL1轴在骨肉瘤细胞增殖、上皮间质转化中的作用。通过生物信息学分析、蛋白质印迹法、荧光定量PCR、RNA免疫沉淀法、双荧光素酶报告基因实验、挽救试验等方法重点研究了CircMYO10发挥作用的机制。通过皮下成瘤模型、尾静脉转移模型研究了circMYO10在骨肉瘤发展、转移中的作用。结果:CircMYO10在骨肉瘤组织(软骨瘤组织作为对照)和细胞系中(hFob1.19细胞系作为对照组)显著上调,而miR-370-3p则显著下调。沉默circMYO10或者过表达miR-370-3p抑制了骨肉瘤细胞在体内的增殖以及上皮间质转化,并且CircMYO10被发现能够通过海绵作用吸附miR-370-3p。机制研究发现RUVBL1是miR-370-3p的其中一个靶基因。在circMYO10敲低的稳转细胞系中敲低miR-370-3p或者过表达RUVBL1可以使受抑制的增殖和上皮间质转化能力得到部分缓解。此外,我们还发现沉默circMYO10在异体种植肿瘤模型中能抑制骨肉瘤细胞的增殖,并且抑制骨肉瘤细胞在尾静脉注射肿瘤转移模型中的肺部转移,通过在circMYO10被沉默的细胞中同时敲低miR-370-3p,我们发现受抑制的骨肉瘤增殖及肺定植能力均得到了有效的缓解。结论:环状RNA CircMYO10通过“海绵”作用吸附miR-370-3p从而上调RUVBL1来促进骨肉瘤进展。
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