鸭疫里氏杆菌是一种引起鸭传染性浆膜炎等疾病的重要病原菌，其主要侵害1～8周龄的鸭，尤其是2～3周龄的雏鸭，并具有高发病率和死亡率的特点。由于鸭疫里氏杆菌极易产生耐药性，因此给临床治疗带来了极大的困扰。目前关于鸭疫里氏杆菌耐药性的研究报道还比较少，尤其是关于分子耐药机制和传播机制的研究鲜有报道。本文旨在了解我国华南地区鸭疫里氏杆菌临床分离株的耐药性情况、耐药基因和整合子携带情况、喹诺酮类耐药决定区的突变情况、β-内酰胺类耐药机制以及鸭疫里氏杆菌多重耐药菌株的遗传相关性等，为兽医临床合理应用抗生素治疗鸭疫里氏杆菌病提供依据，并为鸭疫里氏杆菌分子耐药机制的进一步研究奠定基础。　　1.鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及耐药性调查　　收集来自广东、广西等地区鸭场具有典型的鸭疫里氏杆菌病症状的患病鸭脑组织样品，分离培养鸭疫里氏杆菌，并采用生化方法和PCR方法对疑似菌株进行鉴定。结果共分离得到103株鸭疫里氏杆菌。　　采用琼脂稀释法测定了103株鸭疫里氏杆菌对23种抗菌药物的敏感性。结果显示，链霉素、卡那霉素、庆大霉素、安普霉素、阿米卡星、新霉素、萘啶酸和磺胺二甲嘧啶对鸭疫里氏杆菌的MIC50和MIC90较高(32～≥128μg/mL)，但氨苄西林和氟苯尼考的MIC90较低(8μg/mL)。检测菌株对萘啶酸的耐药率较高(92.2％)；对链霉素、卡那霉素、庆大霉素、安普霉素、阿米卡星、新霉素、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、克林霉素、磺胺二甲嘧啶的耐药率在50％～90％之间；对头孢曲松、头孢他啶、头孢唑啉、头孢西丁、左氟沙星、氯霉素、四环素、替米考星、复方磺胺甲噁唑(复方新诺明)的耐药率在10％～50％之间；耐药率低于10％的药物主要为氨苄西林和氟苯尼考。103株鸭疫里氏杆菌菌株中，有97株菌株(94.0％)对10种以上抗菌药表现为耐药，19株菌株(18.4％)对15种以上抗菌药表现为耐药，多重耐药现象较为严重。　　2.鸭疫里氏杆菌耐药基因、整合子的携带情况　　采用PCR方法对鸭疫里氏杆菌氨基糖苷类、酰胺醇类、四环素类、磺胺类常见耐药基因以及整合子的携带情况进行检测。结果共检测出16种耐药基因，携带aph(3’)-Ⅵ、aadA1、aadA2、aac(3’)－Ⅳ、aac(3’)－IIc、aac(6’)－Ib、cat2、clmA、floR、tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(K)、tet(M)、sul1和sul2基因的菌株数分别为2、24、35、11、4、67、16、26、10、6、1、9、3、11、36和2株。另外，本研究还从28株菌株中检测出Ⅰ类整合子，检出率为27.18％。检出的Ⅰ类整合子具有两种基因盒结构，分别为aadA2和aac(6’)-Ⅱ-catB3-aadA1。　　3.多重耐药鸭疫里氏杆菌传播机制的研究　　采用脉冲场凝胶电泳技术对68株多重耐药菌株进行分子分型，结果有43株成功分型，共获得13种PFGE表型，发现有些来源于相同鸭场或不同鸭场的菌株具有相同的PFGE型。采用接合转移试验、质粒DNA的提取以及化学转化等方法对Ⅰ类整合子的传播机制进行了研究，但均未成功，多重耐药鸭疫里氏杆菌的水平传播机制还需进行更深入的研究。　　4.鸭疫里氏杆菌喹诺酮类耐药机制的研究　　采用PCR和序列比对等方法分析43株萘啶酸MIC值≥32μg/mL的鸭疫里氏杆菌喹诺酮类耐药决定区的突变情况。结果表明，gyrA基因耐药决定区的突变分别为Ser83Ile(n=37)、Asp87His(n=7)、Ser83Arg(n=5)，5株发生parC基因点突变(Arg120Glu)的菌株对环丙沙星的MIC值均大于32μg/mL。此外，采用PCR方法对鸭疫里氏杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnr、aac(6’)－Ib-cr、qepA和oqxAB)的携带情况进行了检测，结果均未检测到。　　5.鸭疫里氏杆菌β-内酰胺类耐药机制的研究　　采用PCR方法检测鸭疫里氏杆菌β-内酰胺类耐药基因(blaTEM、blaCTX-M、blaSHV)的携带情况，并采用琼脂稀释法检测耐药泵抑制剂CCCP对鸭疫里氏杆菌β-内酰胺类药物耐药性的影响。结果只从一株菌株中检测到β-内酰胺类耐药基因blaTEM-1，其他耐药基因均未检测到。鸭疫里氏杆菌对β-内酰胺类药物的敏感性在加入CCCP后发生明显的变化，菌株对氨苄西林、头孢曲松、头孢他啶、头孢唑啉和头孢西丁的耐药率均有所下降。　　6.全文结论　　本研究分离的103株鸭疫里氏杆菌耐药现象比较严重，主要表现为多重耐药。同时携带多种耐药基因，氨基糖苷类钝化酶基因aadA和aac(6’)-Ib、氯霉素类耐药基因clmA、四环素类耐药基因tet(A)和tet(M)和磺胺类耐药基因sul1是引起鸭疫里氏杆菌对相应药物产生耐药性的主要原因。Ⅰ类整合子广泛存在于鸭疫里氏杆菌中，且检出率较高，其携带的基因盒主要介导细菌对氨基糖苷类和氯霉素类药物耐药。本研究首次从临床分离的鸭疫里氏杆菌中检测出cca(3’)－IIc、aac(3’)-Ⅳ、aac(6’)-Ib、aph(3’)-Ⅵ、tet(B)、tet(K)和clmA等耐药基因。本研究分离的鸭疫里氏杆菌主要以克隆传播为主。　　本文首次对鸭疫里氏杆菌喹诺酮类耐药决定区gyrA、gyrB、parC和parE基因的突变以及质粒介导的喹诺酮类耐药基因的携带情况进行了研究。喹诺酮耐药决定区的基因突变是引起菌株对喹诺酮类药物产生耐药性的主要原因。但由于部分具有相同点突变的耐药菌株对喹诺酮类药物MIC值存在差异，说明鸭疫里氏杆菌中可能还存在其他的喹诺酮类耐药机制。　　本研究表明β-内酰胺酶不是引起鸭疫里氏杆菌对β-内酰胺类药物产生耐药的主要机制，而外排泵可能是介导鸭疫里氏杆菌对β-内酰胺类药物耐药的主要机制之一。另外，还可能存在其他的耐药机制，有待进一步研究。本研究首次从鸭疫里氏杆菌中检测出blaTEM-1基因。