第一部分不同浓度氯胺酮对SH-SY5Y神经细胞内质网应激反应水平和凋亡率的影响目的:评价氯胺酮暴露后SH-SY5Y细胞凋亡情况与ERS水平的变化方法:细胞培养:SH-SY5Y细胞在有10%胎牛血清,青霉素（100μg/ml）和链霉素（100μg/ml）的DMEM:Ham’s F12（1:1）中于37℃、5%CO2培养箱中培养。细胞每2-4天传代培养。细胞培养基每1至2天更换一次,并用显微镜观察细胞生长和存活情况。氯胺酮细胞模型制作:分别用浓度为0μM、100μM、300μM、500μM、1000μM、2000μM的氯胺酮处理对数生长期的SH-SY5Y细胞,之后放入CO2培养箱孵育24小时。实验分组:C对照组（0μM氯胺酮）,K1组（100μM氯胺酮）、K2组（300μM氯胺酮）、K3组（500μM氯胺酮）、K4组（1000μM氯胺酮）、K5组（2000μM氯胺酮）。通过CCK8检测细胞活力、流式检测细胞凋亡率、WB:瘦素蛋白Leptin、瘦素受体Lep Rb、GRP78。观察是否伴随氯胺酮浓度的升高可以增加SH-SY5Y细胞中ERS水平和细胞凋亡率,并确定合适的氯胺酮浓度,为后续实验奠定基础。观察氯胺酮对Leptin及Lep Rb的影响,分析氯胺酮是否会对Leptin和Lep Rb产生抑制。结果:1.CCK8结果显示随氯胺酮浓度的升高SH-SY5Y细胞抑制率增加。2.流式结果显示随氯胺酮浓度升高凋亡率增加。3.Western blot结果显示氯胺酮增加GRP78蛋白表达,降低Leptin蛋白和Lep Rb蛋白表达。结论:随氯胺酮浓度的升高可以增加SH-SY5Y细胞中内质网应激反应水平和细胞凋亡率,且会对Leptin、Lep Rb产生抑制作用。第二部分LXA₄ME处理对氯胺酮导致的SH-SY5Y细胞凋亡和Leptin抑制的影响目的:观察LXA₄ ME处理是否可以减轻氯胺酮导致的SH-SY5Y细胞凋亡率,是否可以减轻氯胺酮对Leptin的抑制作用方法:分别用浓度为0、1、10、100nmol/LLXA₄ ME（做梯度实验选取适宜浓度）处理氯胺酮（选取第一部分中适宜浓度的氯胺酮）染毒的SH-SY5Y细胞24小时。实验分组:对照组、K组、K+LXA₄ ME组、LXA₄ ME组。检测方法:CCK8检测细胞活力、流式检测细胞凋亡率、透射电子显微镜观察扩张的内质网、WB检测相关蛋白:包括ERS标志蛋白CHOP、GRP78。凋亡蛋白:cleaved caspase-3、Bcl-2。瘦蛋白Leptin、瘦蛋白受体Lep Rb蛋白。结果:1.CCK8结果显示LXA₄ ME可以减轻氯胺酮引起的细胞抑制率下降。2.流式结果显示LXA₄ ME可以减轻氯胺酮引起的凋亡率降低。3.Western blot结果显示氯胺酮引起CHOP、GRP78、cleaved caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2、Leptin、Lep Rb蛋白降低;而LXA₄ ME可以反转氯胺酮对这些蛋白的影响。4.透射电子显微镜在氯胺酮组可以看到明显扩张的内质网,LXA₄ ME+K组可以观察到内质网扩张减轻。而对照组与LXA₄ ME组内质网状态正常。结论:LXA₄ ME可以通过减轻氯胺酮导致的内质网应激反应缓解神经毒性。第三部分Leptin信号通路在LXA₄ ME减轻氯胺酮神经毒性的机制研究目的:分析Leptin在LXA₄ ME缓解氯胺酮所致神经细胞凋亡中的作用。方法:在第二步基础上加入100 nmol/L leptin抑制剂,实验分组:对照组、K组、K+LXA₄ ME组、K+LXA₄ ME+Leptin TA组、Leptin TA组。检测方法:流式检测细胞凋亡率、透射电子显微镜观察扩张的内质网、WB检测相关蛋白包括CHOP、GRP78。凋亡蛋白:cleaved caspase-3、Bcl-2。结果:1.流式结果显示加入leptin抑制剂逆转了LXA₄ ME减轻氯胺酮的神经细胞凋亡作用。2.Western blot结果显示leptin抑制剂可以逆转LXA₄ ME对氯胺酮诱导的CHOP、GRP78、cleaved caspase-3和Bcl-2蛋白表达的影响。3.透射电镜结果显示K+LXA₄ ME+Leptin TA组逆转了K+LXA₄ ME组对内质网的保护作用。结论:阻断leptin通路可逆转LXA₄ ME缓解氯胺酮致神经细胞凋亡作用