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目的：microRNA(miRNA)是一类长度为20~23nt的在多种真核生物中可以调控基因表达的高度保守非编码小RNA[1,2]。miRNA可以通过与一个或多个mRNA的部分序列互补而调控基因表达进而影响生命活动，它的功能失调常常会引起重要过程出现紊乱，包括器官变化、细胞分化、细胞增殖、细胞存活等[3,4]。而在肿瘤的发生过程中，不同的miRNA可能起着癌基因或者抑癌基因的作用。目前，肺癌是发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一，其病理类型主要为两种，一是进展性较快的小细胞癌，占总体比例的13~15%左右，二是非小细胞癌，包括腺癌，鳞状细胞癌，大细胞癌，大细胞神经内分泌癌等，占总体比例的85%左右[5,6]。肺癌预后较差的原因有多方面，转移是影响肺癌患者疗效和生存时间的关键问题之一，明确的转移机制目前仍然不清楚，因此缺乏有效的治疗手段。目前研究发现，miRNA-449a在胃癌、膀胱癌、前列腺癌等癌症中均有抑癌作用，而miRNA-449a对于肺癌的生物学功能影响尚不清楚，在本研究中我们试图通过对miRNA-449a在肺癌中的生物学作用进行研究，探讨肺癌发生发展过程中的内在机制，为提高肺癌的早期诊断、特异性治疗及预后判断水平提供新的思路，同时探索肺癌的特异性新靶标。方法：（1）基因芯片分析：分别提取高、低不同转移潜能人肺巨细胞癌细胞株95D/95C的总RNA，应用MicroRNA芯片技术检测95C/95D中miRNA-449a的差异性表达水平；（2）使用real-time PCR技术对差异表达的miRNA-449a进行验证:首先提取人肺巨细胞癌细胞株95C/95D的总RNA，然后设计miRNA-449a的反转录引物及上游引物和下游引物，设置内参U6为对照，反转录RNA检测miRNA-449a在95C/95D细胞株中的表达水平，同时使用琼脂糖凝胶电泳对real-time PCR产物进行鉴定。（3）构建过表达miRNA-449a的真核表达载体pCDNA3.1-miR-449a：首先根据miRBase数据库确定miRNA-449a的序列，设计miRNA-449a的扩增引物进行扩增，扩增目的基因并进行鉴定后构建真核表达载体pCDNA3.1-miR-449a，通过酶切及基因测序再次鉴定。（4）建立过表达miRNA-449a的稳定细胞株95D-pCDNA3.1-miR-449a：使用真核表达载体pCDNA3.1-miR-449a转染细胞株95D后应用潮霉素进行筛选，筛选出可稳定过表达miR-449a的细胞株95D-pCDNA3.1-miR-449a并通过real-timePCR技术进行验证。（5）95D-pCDNA3.1-miR-449a细胞株增殖能力检测：设置空白对照组及阴性对照组后，使用MTT法检测稳定过表达miR-449a后95D细胞株增殖能力的变化。（6）95D-pCDNA3.1-miR-449a细胞株迁移能力检测：设置空白对照组及阴性对照组后，使用划痕试验检测稳定过表达miR-449a后95D细胞株迁移能力的变化。（7）95D-pCDNA3.1-miR-449a细胞株侵袭能力检测：设置空白对照组及阴性对照组后，使用Boyden小室实验检测稳定过表达miR-449a后95D细胞株侵袭能力的变化。结果：（1）MicroRNA芯片显示在低转移潜能人肺巨细胞癌细胞株95C中的miRNA-449a水平明显高于高转移潜能人肺巨细胞癌细胞株95D，real-time PCR再次证实了miRNA-449a在人肺巨细胞癌细胞株95C中的水平高于人肺巨细胞癌细胞株95D（；2）成功构建能够过表达miRNA-449a的真核表达载体pCDNA3.1-miR-449a，得到酶切和基因测序的证实后，进一步建立了可过表达miRNA-449a的稳定细胞株95D-pCDNA3.1-miR-449a，并通过了real-time PCR验证；（3）MTT实验证明过表达miRNA-449a后对95D细胞株的增殖无影响（P﹥0.05）；划痕试验表明经过48h培养后，95D-pCDNA3.1-miR-449a细胞株的划痕宽度（298.3±4.382μm）明显大于空白对照组（106.7±3.753μm）和转染空载体组（89.1±4.017μm）（P<0.01），证明过表达miR-449a可以使95D细胞株迁移能力降低； Boyden小室实验表明，95D-pCDNA3.1-miR-449a的细胞透膜数（53.79±3.972）明显小于空白对照组（162.28±3.819）和转染空载体组（150.63±4.625）（P <0.01），证明过表达miR-449a可以使95D细胞株侵袭能力降低。结论：（1）miR-449a在低转移性人肺巨细胞癌细胞株95C中的表达水平明显高于在高转移性人肺巨细胞癌细胞株95D中的水平，提示其可能与肺癌转移相关，有可能成为肺癌治疗的目的基因。（2）成功构建了真核表达载体pCDNA3.1-miR-449a，并建立了稳定过表达miR-449a的95D-pCDNA3.1-miR-449a细胞株，为研究miR-449a对肺癌细胞的生物学功能的影响奠定了基础。（3）过表达miR-449a可以使肺癌细胞株95D的迁移及侵袭能力降低，而增殖能力无变化，显示miR-449a可以抑制肺癌细胞的迁移及侵袭能力，提示miR-449可能与肺癌的转移相关，为肺癌的早期诊断及基因靶向治疗和预后判断提供了新的理论基础。