目的通过观察胰岛素增敏剂罗格列酮对糖耐量减低（IGT）合并非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠肝脏C/EBP （CHOP）mRNA、肝功能及血脂的变化，并在光镜下观察肝细胞的形态学结构改变，以及肝细胞脂肪变性程度的变化，探讨罗格列酮对糖耐量减低合并非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏内质网应激的作用机制。方法将80只雄性Wistar大鼠随机分成两组，正常对照组（NC组，n=20只）与糖耐量减低合并非酒精性脂肪肝组（MC组，n=60只）。NC组以普通饲料喂养，MC组采用高糖高脂饲料喂养，两组大鼠每日早晚各投食一次，投食量约为体重的3%，均自由饮水，室温大致为18～22℃，相对湿度30%～70%。各组动物体重相差小于5%，同组间动物体重相差小于10%。喂养12周后，经口服葡萄糖耐量试验（OGTT）筛选大鼠，具体方法为禁食8小时以上，用快速血糖仪鼠尾取血测空腹血糖（fasting peripheral blood glucose，FBG），以2g/kg葡萄糖注射液（20ml：10g）灌胃，2小时后复测血糖（2hPG），以7.8≤2hPG＜11.1（mmol/L）持续一周以上视为IGT达标，共48只达IGT标准；随机处死12只大鼠，HE染色光镜下观察大鼠肝细胞形态学改变，每张切片随机观察3个不同视野，计量平均每个肝小叶内含脂滴细胞数/总肝细胞数之比（FN/TN%）。以组织学上有33%以上的肝细胞呈弥漫性大泡性脂肪变及气球样变时判定为NAFLD达标，12只大鼠均符合NAFLD标准，MC组80%成模。将MC组随机分为生理盐水对照组（NS组，18只）和罗格列酮干预组（RSG组，18只）。从NC组、NS组、RSG组分别随机抽取10只、9只、9只大鼠，禁食12小时后称重，行OGTT试验检测FBG及2hPG。隔日禁食12~14h，腹腔注射5%水合氯醛（0.7ml/100g.wt），麻醉成功后以腹主动脉穿刺留取血标本，检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）；留取大鼠肝脏标本、脂肪组织标本，计算内脏脂肪相对含量（VF/W），称量肝湿重；取1cm×1cm×0.5cm肝组织块用液氮迅速冷冻，继而置于-70℃冰柜中待用，RT-PCR法检测大鼠肝脏CHOP mRNA的表达。留取0.5cm×0.5cm×0.5cm大小肝组织块，浸泡于10%的福尔马林中24h固定，石蜡包埋备用。RSG组给予罗格列酮（4mg/kg/d），每日早晨一次，共4周；NC组和NS组以生理盐水灌胃作为对照。4周末处死所有大鼠，复测上述各项指标。所有实验数据均运用统计软件SPSS13.0进行统计分析，以均数±标准差（x±s）表示，两样本均数比较采用t检验，多组均数比较采用one-wayANOVA分析，采用Pearson相关分析描述相关性，P＜0.05差异有统计学意义。结果1.各组大鼠体重、肝湿重及内脏脂肪相对含量的比较：干预前，与NC组相比，NS组、 RSG组大鼠体重均增加（433.95±33.71vs.557.58±18.22）（433.95±33.71vs.574.94±27.11），肝湿重增加（10.42±1.64vs.16.38±2.74）（10.42±1.64vs.16.76±1.96），内脏脂肪相对含量增加（1.92±0.20vs.6.83±1.45）（1.92±0.20vs.7.77±1.29），差异有统计学意义（P＜0.05）。与NS组相比，RSG组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05）（，557.58±18.22vs.574.94±27.11）（16.38±2.74vs.16.76±1.96）（6.83±1.45vs.7.77±1.29）。干预4周后，与同期NS组相比，RSG组大鼠体重增加（639.61±24.60vs.669.03±20.15），差异有统计学意义（P＜0.05）；肝湿重、内脏脂肪相对含量降低（22.20±2.52vs.13.92±1.46）（11.79±2.03vs.3.70±0.52），差异有统计学意义（P＜0.05）；RSG组与干预前相比，干预后大鼠体重增加（574.94±27.11vs.669.03±20.15），肝湿重、内脏脂肪相对含量降低（16.76±1.96vs.13.92±1.46）（7.77±1.29vs.3.70±0.52），差异有统计学意义（P＜0.05）。2.各组大鼠空腹及餐后2小时血糖的比较：干预前，与NC组相比，NS组、RSG组大鼠餐后2小时血糖升高（5.27±0.27vs.9.09±0.62）（5.27±0.27vs.9.12±0.60），空腹血糖升高（4.20±0.41vs.5.03±0.36）（4.20±0.41vs.5.11±0.44），差异有统计学意义（P＜0.05）。与NS组相比，RSG组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05），（9.09±0.62vs.9.12±0.60）（5.03±0.36vs.5.11±0.44）。干预4周后，与同期NS组相比，RSG组餐后2小时血糖降低（9.58±0.99vs.5.69±0.56），空腹血糖降低（5.23±0.37vs.4.57±0.26），差异有统计学意义（P＜0.05）；RSG组与干预前相比，干预后餐后2小时血糖及空腹血糖均降低（9.12±0.60vs.5.69±0.56）（5.11±0.44vs.4.57±0.26），差异有统计学意义（P＜0.05）。3.各组大鼠TG、TC、LDL、HDL的比较：干预前，与NC组相比，NS组、RSG组大鼠TG升高（0.95±0.16vs.2.58±0.54）（0.95±0.16vs.2.55±0.53），TC增高（3.87±0.68vs.6.12±0.21）（3.87±0.68vs.6.16±0.20），LDL升高（2.54±0.23vs.3.47±0.22）（2.54±0.23vs.3.81±0.59），HDL降低（1.11±0.11vs.0.79±0.08）（1.11±0.11vs.0.78±0.10），差异有统计学意义（P＜0.05）。与NS组相比，RSG组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05），（2.58±0.54vs.2.55±0.53）（6.12±0.21vs.6.16±0.20）（3.47±0.22vs.3.81±0.59）（0.79±0.08vs.0.78±0.10）。干预4周后，与同期NS组相比，RSG组大鼠TG，TC，LDL均降低（2.69±0.55vs.1.15±0.24）（6.24±0.18vs.5.92±0.24）（3.91±0.55vs.2.51±0.26），HDL增高（0.77±0.07vs.1.14±0.12），差异有统计学意义（P<0.05）；RSG组与干预前相比，干预后大鼠TG、LDL降低（2.55±0.53vs.1.15±0.24）（3.81±0.59vs.2.51±0.26），HDL升高（0.78±0.10vs.1.14±0.12），差异有统计学意义（P<0.05），TC降低（6.16±0.20vs.5.92±0.24），差异无统计学意义（P＞0.05）。4.各组大鼠ALT、AST的比较：干预前，与NC组相比，NS组、RSG组大鼠AST升高（30.06±4.64vs.67.31±5.98）（30.06±4.64vs.68.78±8.67），ALT升高（33.20±5.79vs.74.24±13.36）（33.20±5.79vs.78.95±11.94），差异有统计学意义（P＜0.05）；与NS组相比，RSG组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05），（67.31±5.98vs.68.78±8.67）（74.24±13.36vs.78.95±11.94）。干预4周后，与同期NS组相比，RSG组AST、ALT降低（71.10±7.46vs.33.29±5.70）（80.59±12.26vs.36.23±4.67），差异有统计学意义（P<0.05）；RSG组与干预前相比，干预后大鼠AST、ALT降低（68.78±8.67vs.33.29±5.70）（78.95±11.94vs.36.23±4.67），差异有统计学意义（P<0.05）。5.各组大鼠肝脏CHOP mRNA表达的比较：干预前，与NC组相比，NS组、RSG组肝脏CHOP mRNA表达升高（0.15±0.03vs.1.03±0.17）（0.15±0.03vs.1.06±0.15），差异有统计学意义（P<0.05）；RSG组与NS组相比，差异无统计学意义（P>0.05），（1.03±0.17vs.1.06±0.15）。干预4周后，与同期NS组相比，RSG组CHOP mRNA表达降低，（1.06±0.18vs.0.47±0.12），差异有统计学意义（P<0.05）；RSG组与干预前相比，干预后CHOP mRNA表达降低（1.06±0.15vs.0.47±0.12），差异有统计学意义（P<0.05）。6.各组大鼠肝脏病理学变化：1）肝脏大体观变化：干预前，NC组大鼠肝脏大致正常，外观呈暗红色，边缘较锐，质地柔软，弹性好，表明光滑；MC组肝脏体积较NC组明显增大，外观呈黄褐色，边缘饱满，表面散在分布颗粒状小突起，包膜紧张，质地较韧，触之有油腻感；生理盐水对照干预4周后肝脏无明显形态学改变。罗格列酮干预4周后肝脏外观呈红褐色，表面散在分布些许颗粒突起。2）HE染色后光镜观察肝脏病理学变化：干预前，NC组肝细胞排列正常，中央静脉清晰易识别，管腔粗，肝细胞索规则分布。MC组肝细胞显著脂肪样变，体积增大，部分区域呈弥漫性气球样变性，胞核被推向周边，肝小叶结构不清，边界消失，肝细胞索排列紊乱，部分肝组织呈灶状坏死。生理盐水干预4周后，NS组肝细胞呈中到重度脂肪变，肝细胞体积增大，可见大小不一的脂滴空泡，出现散在点状坏死灶。罗格列酮干预4周后，RSG组肝细胞呈轻度脂肪变，可见少许脂滴空泡，但较未干预前明显改善，未见坏死灶。7.各组大鼠肝细胞脂变程度的比较：干预前，与NC组相比，NS组、RSG组肝细胞脂肪变数量占肝细胞总数的比值升高（0.00±0.00vs.48.67±11.51）（0.00±0.00vs.49.22±12.07），差异有统计学意义（P<0.05）；与NS组相比，RSG组差异无统计学意义（P>0.05），（48.67±11.51vs.49.22±12.07）。干预4周后，与同期NS组和干预前RSG组相比，RSG组的比值降低（87.44±7.04vs.38.44±7.21）（49.22±12.07vs.38.44±7.21），差异有统计学意义（P<0.05）；与同期NC组相比升高（0.00±0.00vs.38.44±7.21），差异有统计学意义（P<0.05）。8.肝脏CHOP mRNA与肝细胞脂肪变性程度相关性分析：Pearson相关分析显示，IGT合并NAFLD大鼠肝脏CHOP mRNA的表达与脂肪变性肝细胞数与总肝细胞数的比值呈显著正相关（r=0.959，P＜0.01）。结论1. Wistar大鼠经12周高糖高脂饲料喂养，能成功建立糖耐量受损合并非酒精性脂肪性肝病动物模型，成模率为80%。2.罗格列酮可降低IGT合并NAFLD大鼠肝细胞CHOP mRNA的表达，改善内质网应激，逆转肝细胞脂肪变性，为非酒精性脂肪性肝病的早期防治提供实验依据。