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枸杞子(Fructuslycii)是我国传统的中药材和重要经济作物,具有滋肾补肝、润肺明目等功能。近年来,对枸杞子的药理作用进行了深入研究,发现枸杞子能增强机体免疫力,抗肿瘤,防衰老增加造血功能等。临床医学研究表明,枸杞子对糖尿病。高血压,肾炎等有显著疗效。上述药理作用于枸杞多糖有关。因此开发枸杞多糖相关保健产品具有十分广阔的前景,本文就枸杞多糖的分离与纯化进行了探讨,并对枸杞粗多糖在小鼠体内抗氧化作用进行了初步研究,为今后更深入地研究枸杞多糖的化学结构和活性功能等工作提供基础资料。实验主要结论如下:
1.采用水提醇沉法提取了枸杞粗多糖,正交实验得出最佳提取条件为:料水比1:40,温度100℃,时间5h,此条件下枸杞多糖得率为11.56%。
2.采用微波与超声波两种方法对枸杞子干粉预处理,发现微波处理当微波处理25min时,多糖得率达到15.91%;而超声波处理20min达到最好效果,多糖得率为13.27%,之后随着处理时间的延长多糖得率呈下降趋势。
3.比较了Sevag法与三氯乙酸法对枸杞粗多糖蛋白质的脱除效果,实验表明,三氯乙酸—正丁醇法去蛋白尽管次数少,过程简单,但其效果不及Sevag法,并且三氯乙酸—正丁醇法去蛋白反应比较剧烈,对多糖具有较大破坏性,多糖损失率比较大;实验最终选用Sevag法去蛋白。
4.脱蛋白多糖经DEAE—纤维素柱层析,分别用蒸馏水、0.05-0.5mol/LNall梯度洗脱,得到五种级分:LBPⅠ、LBPⅡ、LBPⅢ、LBPⅣ、LBPⅤ;选取LBPⅡ、LBPⅢ、LBPⅣ三种量较多的组分经SephadexG-200进一步纯化,得到四种主要组分:LBPⅡa、LBPⅢb、LBPⅣa、LBPⅣb;通过醋酸纤维薄膜电泳及SephadexG-200凝胶过滤法进行纯度鉴定,正明为均一多糖。
5.用高(400mg/kg.d)、中(200mg/kg.d)、低(100mg/kg.d)剂量的枸杞粗多糖生理盐水溶液对D-半乳糖(100mg/kg.d)之衰老模型小鼠灌胃30天。结果表明:枸杞粗多糖能较显著提高小鼠血清、肝脏及脑组织中SOD活性,降低MDA含量;此外还能极显著提高正常小鼠常压耐缺氧能力和游泳抗疲劳能力。
6.对正常小鼠灌胃高中低剂量的枸杞粗多糖生理盐水溶液15天,发现一定浓度的枸杞粗多糖确实能够提高小鼠的脾指数和胸腺指数,说明枸杞粗多糖对提高小鼠的机体免疫水平具有重要的促进作用。