厚朴酚与和厚朴酚高效提制技术及抗菌活性研究

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厚朴是我国特有的常用中药材,分布较广,与杜仲、黄柏并称为“三木”药材,与麝香、甘草、杜仲同为国家计划与管理的四种重要中药材之一,具有消除胸腹满闷、止痛、健胃、下气降逆、止咳、去除水毒、活血化淤的功效。主要功效成分为苯丙素酚类化合物厚朴酚及和厚朴酚,其含量多少直接影响厚朴的品质。厚朴生长周期长,一般需16~20年,因此最大限度的将厚朴皮中厚朴酚及和厚朴酚提取出来并对其进行纯化具有重要意义。本研究对厚朴酚及和厚朴酚的检测方法、提取纯化条件、抗菌杀菌活性做了较系统的研究,获得了如下研究结果:1、建立了HPLC法同时检测厚朴酚及和厚朴酚的方法。检测条件为色谱柱:Kromasil C18(4.6mm×200mm);流动相:甲醇-水(80:20);检测波长:294nm;流速:1.0mL/min柱温:40℃;进样量10μL;时间:15min。并做标准曲线,厚朴酚:y=307867x-2772022,R2=0.9946。和厚朴酚:y=331192x-302287,R2=0.9943。此方法重复性好,稳定,准确度高。2、优化了厚朴酚及和厚朴酚提取条件,获得最佳提取工艺参数。采用乙醇水溶液作为提取溶剂的最佳工艺参数为:乙醇浓度为70%,料液比1/24,时间为2h,提取两次,沸水浴。对超临界CO2萃取法提取厚朴酚及和厚朴酚的条件作了初步探讨,确定了提取条件。3、以厚朴酚及和厚朴酚总量作为考察指标,建立了柱色谱分离纯化厚朴酚及和厚朴酚的条件。研究表明,采用HP-20大孔树脂,140mL树脂柱最佳分离纯化条件为:上样浓度为4/7(g/mL),上样3 g,流速1.5 BV/h。选择乙醇-水溶液作为洗脱液,浓度变化为:水洗,65%乙醇洗杂质,78%乙醇洗脱和厚朴酚,87%乙醇洗脱厚朴酚,每梯度洗脱3 BV。厚朴酚及和厚朴酚纯度分别可达:96.4%、78.9%。4、获得厚朴酚及和厚朴酚的抑菌效果的差异性。厚朴酚及和厚朴酚均能抑菌且抑制能力均为:巴氏杆菌>链球菌>大肠杆菌>沙门氏菌>金黄色葡萄球菌。对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用中,厚朴酚的抑制效果明显优于和厚朴酚,但和厚朴酚对巴氏杆菌的抑制效果优于厚朴酚。厚朴酚及和厚朴酚对细菌的杀灭能力为:链球菌>巴氏杆菌>金黄色葡萄球菌=沙门氏菌>大肠杆菌。其中和厚朴酚对大肠杆菌与巴氏杆菌的杀灭能力优于厚朴酚,但对链球菌来说,厚朴酚的杀菌效果优于和厚朴酚。
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