【摘 要】
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目的：克隆人白细胞介素21(Interleukin，IL-21)基因，构建真核表达载体pcDNA3.1-hIL-21，在哺乳动物细胞COS-7进行表达和鉴定，获得具有生物活性的重组人白细胞介素21(rhIL-21)，用于其
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目的：克隆人白细胞介素21(Interleukin，IL-21)基因，构建真核表达载体pcDNA3.1-hIL-21，在哺乳动物细胞COS-7进行表达和鉴定，获得具有生物活性的重组人白细胞介素21(rhIL-21)，用于其功能研究。
方法：(1)分离正常人外周血单个核细胞(PBMC)，加PHA和IL-2诱导培养，提取总RNA，设计引物，PCR克隆IL-21基因；(2)Xho Ⅰ和HindⅢ分别双酶切RT-PCR产物和pcDNA3.1(-)质粒，回收后用T4DNA连接酶连接得到重组质粒pcDNA3.1-hIL-21；(3)转化EcoliDH5α，用Amp平板筛选阳性克隆，提取重组质粒进行双酶切、PCR和测序鉴定；(4)重组质粒pcDNA3.1-hIL-21经中量抽提后采用FuGENE6脂质体法转化COS-7细胞；(5)SDS-PAGE及Western Blot鉴定重组蛋白的表达；(6)MTT法检测重组人IL-21对人外周血淋巴细胞增殖作用。
结论：成功构建了人IL-21真核表达载体pcDNA3.1-hIL-21，并在哺乳动物细胞COS-7中成功表达，获得了具有生物学活性的蛋白。
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