目的克隆并表达肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)F4ac菌毛蛋白亚单位FaeG,鉴定其抗原性和免疫原性,为制备预防幼畜ETEC感染的疫苗奠定基础。方法以ETEC(C83902)基因组DNA为模板,PCR扩增faeG基因,插入原核表达质粒pGEX-6P-1,构建重组质粒pGEX-faeG。将pGEX-faeG转化大肠埃希菌BL-21,IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达蛋白的相对分子质量和表达形式,Western blot鉴定其抗原性。将表达菌超声破碎后离心提取包涵体制备抗原,经口灌喂免疫小鼠,检测小鼠血清中抗FaeG的IgG、IgA,粪便IgA和肠粘液IgA,鉴定其免疫原性。重组蛋白FaeG口服免疫小鼠,进行动物免疫保护实验。结果扩增的faeG基因全长786bp,与基因文库中的faeG基因同源性达96%。重组质粒pGEX-faeG经PCR及双酶切鉴定确有插入片段,且序列完整。表达产物FaeG相对分子质量约53KD,主要存在于碎菌后的沉淀中,以包涵体形式表达。Western blot显示该蛋白可与ETECF4ac阳性血清特异性结合,免疫后小鼠体内抗FaeG IgG、IgA明显高于PBS对照组和GST对照组。免疫小鼠至少能抵抗1MLD的大肠埃希菌强毒株C83902的攻击。结论成功构建了ETEC F4ac菌毛蛋白亚单位FaeG的重组质粒pGEX-faeG,表达了重组蛋白FaeG,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于研制预防幼畜ETEC感染的疫苗。