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树鼩(Tupaia)是一种形似松鼠的小型哺乳动物,分类地位介于原始食虫类与原始灵长类之间,独立称之为攀鼩目,目前正处在人工驯化过程中,被誉为实验动物新星。致病性病毒严重危害树鼩生命健康,但却鲜见有关树鼩自然感染病毒的报告。为明确树鼩自然感染病毒种类,采集6份因腹泻死亡的野生树鼩粪便,用Vero细胞进行病毒分离,72h后细胞发生病变,特征为颗粒增多,破碎,变圆固缩,拉网,脱落；电镜观察显示该病毒为球形,双层衣壳,完整直径75nm左右；纯化的病毒经核酸PAGE电泳,呈现出10个核酸节段,并为典型的3：3：4排列；经哺乳动物呼肠孤病毒(Mammalian Orthoreovirus, MRV) L1基因保守区RT-PCR检测、序列分析、进化树构建,结果表明,该病毒株属于MRV,初步命名为树鼩呼肠孤病毒(Tupaia Orthoreovirus, TRV)。目前,尚无关于TRV病毒基因组信息的报道,为揭示TRV基因组的分子生物学特征,,有必要进行该病毒S1基因重组质粒的构建。为获得该病毒S1序列,本研究根据GenBank中登录的哺乳动物MRV S1基因序列设计了4对引物,应用RT-PCR技术,快速扩增出S1基因,将S1基因连接入pMD19-T Vector,转化大肠杆菌DH5a,构建S1重组质粒。本研究成功扩增并克隆了TRVS1基因全长cDNA,并成功构建了S1基因重组质粒。S1基因测序结果表明,S1基因全长1463bp,含两个阅读框ORF,分别编码δ1蛋白和δ1S蛋白。S1基因与各标准株(TIL、T2J、 T3D、NEDV)在S1基因组节段上的差异极大,其氨基酸序列相似性分别为86%、44%、23.7%、23.2%。基于S1基因组节段的推导氨基酸序列绘制的分子进化树,支持相同血清型的病毒株位于同一进化分支中。通过该病毒株S1基因氨基酸同源性分析和核苷酸系统发育进化树分析,初步判断该病毒株血清型为血清1型且与人源呼肠孤病毒1型同源性最高。推导TRVS1编码的δ1蛋白和δ1S蛋白蛋白的预测结果表明：1.δ1蛋白和δ1S蛋白蛋白均为亲水性蛋白,无信号肤序列。2.δ1蛋白含个3糖基化位点,5个苏氨酸磷酸化位点T-、5个丝氨酸磷酸化位点S-、1个天冬酰胺磷酸化位点D-、2个脯氨酸磷酸化位点P-、1个酪氨酸磷酸化位点Y-;δ1S蛋白含个3糖基化位点,1个苏氨酸磷酸化位点T-、4个丝氨酸磷酸化位点S-。3.61蛋白二级结构主要成分为B折叠,在20～80aa,95～135aa,180～195aa,210～225aa,230～245,265～295aa,310～340aa,390～440aa抗原指数显著。61蛋白二级结构主要成分为a螺旋和B折叠,在1～18aa,58～67aa,抗原指数显著。MRV是人兽共患病病毒,我们首次从树鼩体内成功分离到的MRV,对今后研究制定实验树鼩病毒学控制标准具有指导意义,同时为有效预防该病毒在树鼩与人类之间传播提供了实验依据。同时,TRVS1基因重组质粒的成功构建,为今后研究TRV生物学特征、深入研究呼肠孤病毒致病机制、揭示呼肠孤病毒与疾病的关系提供了可靠的生物材料。