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目的
观察淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)与同源树突状细胞(DC)共培养后DC-LAK细胞增殖活性、表型的变化，及其对肺癌细胞株的杀伤效应。
方法
采集12例健康成人自愿者的无菌静脉血30毫升，密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞(PB-MC)，用RPMI 1640培养液，置培养箱培养2小时，收集非贴壁细胞加入重组白细胞介素-2(rhlL-2)用于诱导培养LAK细胞，贴壁细胞中加入重组白细胞介素-4(rhlL-4)、重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导分化DC。倒置显微镜观察细胞的形态和增殖情况。应用流式细胞仪(FCM)测定细胞表型上变化鉴定这两种细胞。将培养到第七天的两种细胞，分成三组：第一组：①肿瘤冻融抗原刺激的肺腺癌细胞A549(DC-A549-LAK)组；②肿瘤冻融抗原刺激的小细胞肺癌细胞NCI-H446(DC-NCI-H446-LAK)组，第二组：未加抗原刺激的DC-LAK组，第三组：单纯培养的LAK组(对照组)，继续培养。倒置显微镜观察每组细胞的增殖情况；用FCM测定细胞表型变化；利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测效应细胞在体外对人肺癌细胞株的杀伤活性。
结果
1．体外诱导单个核细胞培养中加入细胞因子后，诱导出具有典型形态和免疫表型的DC和LAK细胞。2．共培养后DC-LAK细胞的免疫表型CD3、CD8、CD3<+>CD8<+>、CD3<+>CD56<+>的表达增加和细胞增殖率增加。经抗原冲击后的DC-A549-LAK组及DC-NCI-H446-LAK组的CD3表达分别为(59.17±3.92)％和(60.89±4.39)％，显著高于对照组(38.34±4.57)％(p<0.05)；CD8细胞最高表达为(54.56±1.60)％和(54.12±3.06)％，对照组为(28.99±4.17)％，实验组与对照组相比有显著性意义(p<0.05)；CD<3>+CD8<+>最高表达为(52.04±3.92)％和(50.79±3.54)％，对照组(26.17±5.72)％，两者相比有显著性意义(p<0.05)；CD3<+>CD56<+>最高表达(40.56±1.09)％和(41.25±2.35)％，对照组(23.15±3.11)％，实验组与对照组相比有显著性意义(p<0.05)；CD4变化不明显。在共培养第16天细胞增殖倍数：DC-A549-LAK组、DC-NCI-H446-LAK组分别是诱导前的(96.42±2.98)倍和(97.28±3.96)倍，DC-LAK组是(81.42±2.12)倍，LAK对照组为(42.23±3.14)倍，两者在增殖倍率上有显著意义(p<0.05)。3．MTT显示共培养后的LAK细胞杀伤肿瘤细胞活性增强。DC-A549-LAK组对A549细胞的杀伤率为(86.92±7.78)％明显高于LAK组的(56.97±9.30)％(P<0.05)，DC-NCI-H446-LAK组对NCI-H446细胞的杀伤率为(84.56±8.01)％，明显高于LAK组的(46.28±6.25)％(P<0.05)。
结论
1．从外周血单个核细胞中诱导出具有典型形态和免疫表型的13(2和LAK细胞。
2．DC和LAK细胞共培养后，Dc-LAK细胞的增殖活性，免疫表型高于单纯培养的LAK细胞。3．共培养的DC-LAK细胞在杀伤活性方面显著强于单纯培养的LAK细胞组。4．经肿瘤抗原刺激的DC-LAK共培养细胞抗肿瘤效应增强更显著，为肿瘤细胞的过继性免疫治疗提供了科学依据。