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从罹患“腹水病”日本鳗鲡体内分离到1株细菌,经生化鉴定结果表明分离菌是迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda,ET),将其命名为ETY。以腹腔注射感染日本鳗鲡,通过柯赫法则验证了ETY是日本鳗鲡的致病菌。建立了巢氏PCR检测方法并用于检测拟似爱德华氏菌分离株,经生化鉴定平行验证,结果表明巢氏PCR法检测结果与生化鉴定结果高度吻合,证明巢氏PCR技术可以用于迟缓爱德华氏菌快速鉴定和初筛。制备了ETY和ETV二种迟缓爱德华氏菌抗血清并用于爱德华氏菌分离株的血清分型,试验结果显示ETY,ETLi和ET030906属同一血清型,ETV属另一种血清型。采用不同的方法提取、纯化迟缓爱德华氏菌鞭毛蛋白(Edwardsiella tardaflagellin,ETFP),比较了各种方法的纯化结果,筛选出最佳的ETFP提取、纯化方法。制备了鼠抗ETFP血清和鼠抗ETY全菌血清,应用ELISA和Western-blotting分析了ETFP的抗原性和免疫原性。试验结果表明:酸化高速离心法可获得高纯度的ETFP,其分子量约为44kDa;纯化的ETFP能被鼠抗ETY全菌血清识别,鼠抗ETFP血清能特异性地识别纯化的ETFP和爱德华菌菌体裂解产物中44kDa的蛋白条带,证实了纯化的ETFP具有抗原性和免疫原性,可作为亚单位疫苗的候选抗原。借助巢式PCR技术从ETY的基因组克隆到其鞭毛蛋白基因(ETF)。该基因开放阅读框为1257bp,编码418个氨基酸,推导的蛋白分子量为43.951kDa。将ETF基因定向连接到pET32b(+)表达载体并转化至E.coli BL21(DE3),获得可溶性表达,ETFP-TrxA融合蛋白的表达量达到菌体蛋白总量的50.1%。ELISA和Western-blotting分析结果表明:ETFP-TrxA融合蛋白与ETY的鞭毛蛋白具有相似的抗原性和免疫原性。免疫试验结果表明:ETFP-TrxA融合蛋白与ISA763A佐剂乳化后接种日本鳗鲡,于免疫后第21天攻毒,免疫保护率可达100%。本研究建立了迟缓爱德华氏菌的巢氏PCR检测法;应用酸化高速离心法提取了高纯度的迟缓爱德华氏菌鞭毛蛋白;成功地克隆了鳗源迟缓爱德华氏菌的ETF基因,并获得了ETF基因的高效表达;证实了ETFP-TrxA融合蛋白与ETFP具有相似的抗原性和免疫原性,并能诱导免疫鱼产生良好的免疫力;上述研究结果为迟缓爱德华氏菌病临床快速检测和鞭毛蛋白亚单位疫苗研发奠定了基础。