论文部分内容阅读
研究背景与目的：新近的一些研究提示某些钾离子通道与恶性肿瘤的发生发展有关。其中电压门控性钾通道与肿瘤的关系成为了研究热点。EAG家族成员均是电压门控外向整流性钾通道,而hERG通道却有介导内向整流性钾电流的特性,尽管这些通道在结构上是高度同源的。近年来很多研究发现它和细胞的增殖、分化、凋亡以及肿瘤形成有关。该通道蛋白在许多的肿瘤细胞中高表达,而在其相应来源的正常组织中却是不表达或者低表达。它在肿瘤中参与肿瘤分化和增殖过程中的信号转导过程,与肿瘤的侵袭和转移相关。异常增强的增殖或削弱凋亡引起细胞生长失控导致肿瘤发生致癌。国外已有研究HERG蛋白在多种肿瘤细胞中的高表达。本研究试图阐明HERG离子通道抑制剂红霉素对有HERG表达结肠癌细胞增殖与凋亡的影响以及有关的可能机制。方法：(1)常规方法培养人结肠癌细胞株HT-29,接种后培养24-36h再加药干预,分为0,50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L。(2)MTT法,细胞计数法检测HT-29细胞用红霉素不同浓度干预后不同时间段的影响。细胞存活率=(实验孔A值/对照孔A值)×100%；Annexin V/PI双标法流式细胞术检测运用HERG抑制剂红霉素对HT-29细胞凋亡的影响；运用细胞粘附Ⅰ型胶原检测方法,检测红霉素不同浓度对HT-29细胞粘附的影响；然后检测HT-29细胞移动性,通过计算细胞在划痕两边的Oh,24h之间的生长距离,计算细胞的迁移能力。(3)Western-blotting法检测蛋白表达。结肠癌HT-29细胞用不同浓度红霉素干预24h后,收集细胞蛋白,用western blotting检测HERG蛋白的表达,同时检测相对应的凋亡相关蛋白P53,Bax的表达。结果：(1)MTT实验和细胞计数法显示红霉素抑制结肠癌细胞HT-29的生长增殖,且随着作用时间的增加,抑制率也增加,呈典型的时间—剂量依赖关系。(2)红霉素和结肠癌细胞共同作用24h后,当红霉素浓度达到100μmol/L,200μmol/L时和正常对照组细胞凋亡数相比,两者之间有明显的差异性(P<0.05)；细胞粘附实验则表明随着红霉素浓度的增加,细胞粘附Ⅰ型胶原的能力下降；当用红霉素浓度为100μmol/L,对照组的迁移速度为6.146±0.3767μm/h,实验组的迁移速度为1.719±0.1864μm/h,两者相比较,其差异具有统计学意义(P<0.01) (3)红霉素干预细胞后,细胞的HERG蛋白随着红霉素浓度的增加而表达降低,而相关的凋亡基因蛋白Bax,P53的表达则是增强。其与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论：红霉素在能抑制钾离子通道HERG表达的HT-29细胞的增殖,并且能是肿瘤细胞的迁移能力降低,诱导肿瘤细胞的凋亡,导致相关的凋亡基因蛋白Bax,抑癌基因蛋白P53的表达随着HERG蛋白表达降低而增加。