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8-氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(human MutT homolog 2,hMTH2)也称作NUDT15(nucleoside diphophate–linked moiety X-type motif),隶属于Nudix水解酶超家族,参与细胞中被氧化的脱氧核糖核苷酸的清除,可减少DNA氧化,降低DNA突变率。MTH2为细胞提供一种免受DNA损伤的保护机制,将来可以作为肿瘤甚至是其他相关疾病临床治疗的靶分子。但是,目前MTH2基因自身的调控机制尚未明确。我们将在本实验室前期研究的基础上,深入探讨MTH2基因转录调控机制,结合生物信息学分析、分子生物学实验确定与MTH2基因启动子结合的转录因子及其结合位点,并通过过表达和敲低转录因子,来进一步明确MTH2基因启动子的转录调控机制。首先用双报告检测试剂盒检测MTH2启动子转染不同肿瘤细胞株的萤火虫荧光素酶报告基因活性,确定MTH2基因启动子在肝癌细胞中具有特异性表达及活性。接着将MTH2基因启动子做5’端缺失突变克隆,检测MTH2启动子各片段转染肝癌细胞株的萤火虫荧光素酶报告基因活性,确定启动子转录调控的关键区域是MTH2-176~+75nt。接着通过JASPAR、TRANSFAC等软件分析,预测MTH2基因启动子关键区域中转录因子结合位点,然后构建转录因子结合位点的缺失突变或点突变载体,检测以上突变体对启动子活性的影响。构建转录因子的过表达载体,或用siRNA敲低转录因子的表达,检测MTH2 mRNA、蛋白水平的变化。结果表明,转录因子Pax4和CREB1的缺失突变及点突变都会使MTH2启动子荧光素酶活性降低,过表达Pax4和CREB1,使MTH2启动子荧光素酶活性升高;并且MTH2转录及翻译水平升高;敲低Pax4和CREB1的表达,MTH2启动子荧光素酶活性降低,并且MTH2转录及翻译水平降低。以上结果表明Pax4和CREB1直接结合MTH2启动子,从而调控MTH2基因启动子的转录水平。