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第一部分1,25（OH）2D3抑制高糖介导的大鼠肾小球系膜细胞的增殖作用的研究目的:观察高糖对大鼠肾小球系膜细胞增殖及肥大的影响;摸索高糖及1,25（OH）2D3对肾小球系膜细胞的最佳干预条件;观察1,25（OH）2D3对高糖介导的肾小球系膜细胞增殖的影响。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）,用不同浓度葡萄糖培养HBZY-1细胞:（1）正常葡萄糖浓度组（normal glucose,NG）:葡萄糖浓度为5.5mmol/L培养基进行HBZY-1细胞培养;（2）高葡萄糖浓度组15（high glucose,HG15）:葡萄糖浓度为15mmol/L培养液进行HBZY-1细胞培养;（3）高葡萄糖浓度组25（high glucose,HG25）:葡萄糖浓度为25mmol/L培养液进行HBZY-1细胞培养;（4）高葡萄糖浓度组35（high glucose,HG35）:葡萄糖浓度为35mmol/L培养液进行HBZY-1细胞培养。光镜下观察细胞直径变化,台盼蓝拒染法观察细胞增殖情况,确定体外模拟糖尿病肾病的最佳葡萄糖干预浓度;MTT法检测1,25（OH）2D3对高糖介导的HBZY-1细胞增殖的抑制作用,确定1,25（OH）2D3干预HBZY-1细胞的最佳条件;Lenti-sh VDR转染入HBZY-1细胞,RT-PCR及western blot分别检测包含4条干扰序列的Lenti-sh VDR的m RNA及蛋白表达水平,筛选Lenti-sh VDR的最佳干扰序列。细胞随机分组为:（1）正常葡萄糖浓度组（normal glucose,NG）:葡萄糖浓度为5.5mmol/L培养基进行HBZY-1细胞培养。（2）高葡萄糖浓度组（high glucose,HG）:用高浓度葡萄糖配制培养基,进行HBZY-1细胞培养。（3）高葡萄糖浓度+1,25（OH）2D3干预组（HG+1,25（OH）2D3,HV）:在高糖培养的基础上,向培养基中加入1,25（OH）2D3共培养。（4）高葡萄糖浓度+Lenti-sh VDR组（HG+Lenti-sh VDR,HL）:用高浓度葡萄糖培养经Lenti-sh VDR转染后的HBZY-1细胞。（5）高葡萄糖浓度+Lenti-sh VDR+1,25（OH）2D3干预组（HG+Lenti-sh VDR+1,25（OH）2D3,HLV）:在高糖培养转染Lenti-sh VDR的HBZY-1细胞的基础上,向培养基中加入1,25（OH）2D3共培养,流式细胞周期法检测各组细胞的增殖情况,观察1,25（OH）2D3对高糖介导的肾小球系膜细胞增殖的影响。结果:（1）倒置显微镜下,HBZY-1细胞在传代后48小时呈贴壁生长,长梭形,透明,折光性好,大小均一,形态一致。但随着葡萄糖干预浓度的增高,细胞密度逐渐增大,偶见发亮的漂浮细胞。当葡萄糖浓度达到35mmol/L时,细胞增殖反而被抑制,且漂浮细胞增多。比较各组细胞的直径后发现,HG25组及HG35组的HBZY-1细胞相较NC组出现了明显的增大（P<0.05）。台盼蓝拒染实验结果显示,NG组、HG11组在各时间点对HBZY-1细胞无明显的增殖促进作用;与NG组相比,HG25组在48小时开始对HBZY-1细胞的增殖有促进作用,再增高葡萄糖浓度,HG35组的细胞增殖反而被抑制（P<0.05）。（2）MTT法检测结果显示,1,25（OH）2D3对高糖介导的HBZY-1细胞增殖的抑制作用呈时间浓度依赖性,当浓度达到1μM/L时其抑制作用最大化;而当1,25（OH）2D3干预时间达到24小时时,HBZY-1细胞的增殖出现有统计学意义的降低,再延长干预时间至36小时,其抑制作用并没有进一步增强（P<0.05）。（3）流式细胞周期法检测结果显示,HG组HBZY-1细胞的S期相比NC组出现了明显增高,而HV组细胞的S期较HG组明显降低,同时HL及HLV组细胞的S期则较HV组明显上升（P<0.05）。结论:葡萄糖培养大鼠肾小球系膜细胞体外模拟糖尿病肾病的最佳干预浓度为25mmol/L,1,25（OH）2D3干预肾小球系膜细胞的最佳条件为1μM/L干预24小时,1,25（OH）2D3能够有效抑制高糖介导的肾小球系膜细胞的增殖。第二部分1,25（OH）2D3对早期糖尿病肾病模型大鼠肾脏的保护作用研究目的:观察1,25（OH）2D3和Lenti-sh VDR单独或联合干预对早期糖尿病肾病模型大鼠肾脏功能的影响。方法:构建大鼠糖尿病肾病模型,随机分组为:（1）正常对照组（normal control,NC组）;（2）糖尿病肾病组（diabetic nephropathy,DN组）;（3）糖尿病肾病+1,25（OH）2D3干预组:（DN+1,25（OH）2D3,DV组）;（4）糖尿病肾病+Lenti-sh VDR干预组（DN+Lenti-sh VDR,DL组）;（5）糖尿病肾病+Lenti-sh VDR+1,25（OH）2D3干预组:（DN+Lenti-sh VDR+1,25（OH）2D3,DLV组）。检测每组大鼠体重、肾重、空腹血糖、血压、血脂、血钙;Elisa法检测大鼠的血和尿中白蛋白、血清高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、甲状旁腺激素（PTH）、25（OH）D水平;荧光显微镜下观察Lenti-sh VDR转染大鼠情况;光镜下观察各组大鼠肾脏病理改变,计算肾脏总体积、平均肾小球体积;透射电子显微镜下观察各组大鼠肾脏改变,测量肾小球基底膜厚度。结果:（1）DN组体重相比NC组出现了明显的减轻,而DN组的肾脏重量（KW）及肾脏与体重的比值（KW/BW）则明显高于NC组。在应用了1,25（OH）2D3干预后此效应有所减弱。血压的比较在5组大鼠之间没有显著的差异。DN组的大鼠空腹血糖（FPG）、血浆总甘油三酯（TG）及24小时尿白蛋白水平明显高于NC组。DV组大鼠24小时尿白蛋白水平相比DN组有所减弱。DN组大鼠的血清HMGB1水平明显高于NC组,而DL及DLV组大鼠则显著高于DV组大鼠。血钙及血清甲状旁腺激素水平在DN及NC组之间没有差异,而DL及DLV组相比NC组则出现了血钙的下降和甲状旁腺激素的升高。另外,DN组大鼠的血清25（OH）D水平与NC组及DV组大鼠相比都有明显下降,同时DL及DLV组大鼠的血清25（OH）D则比DV组明显升高（P<0.05）。（2）无论是肝脏还是肾脏,DL及DLV组的大鼠组织切片在荧光显微镜下都可见荧光表达,而NC组、DN组及DV组则没有观察到荧光表达。（3）DN组大鼠的总肾体积较NC组大鼠有明显增大,而DV组大鼠的总肾体积则较DN组大鼠有明显减小。DN组、DL组及DLV组的平均肾小球体积（MGV）比NC组增大,而DV组的MGV比DN组明显减小。DN组、DL组及DLV组的肾小球基底膜（GBM）厚度较NC组明显增厚,而DV组的GBM则较DN组明显变薄（P<0.05）。结论:1,25（OH）2D3能够有效降低早期糖尿病肾病模型大鼠的尿蛋白排泄,有效地减小早期糖尿病肾病模型大鼠的总肾体积、平均肾小球体积及肾小球基底膜厚度,改善及延缓糖尿病肾病的病理发展。且此效果可能依赖于与其维生素D受体（VDR）的结合。第三部分1,25（OH）2D3对mTOR介导的早期糖尿病肾病的干预机制的研究目的:探讨1,25（OH）2D3改善mTOR介导的早期糖尿病肾病的可能机制。方法:构建大鼠糖尿病肾病模型,随机分组为:（1）正常对照组（normal control,NC组）;（2）糖尿病肾病组（diabetic nephropathy,DN组）;（3）糖尿病肾病+1,25（OH）2D3干预组:（DN+1,25（OH）2D3,DV组）;（4）糖尿病肾病+Lenti-sh VDR干预组（DN+Lenti-sh VDR,DL组）;（5）糖尿病肾病+Lenti-sh VDR+1,25（OH）2D3干预组:（DN+Lenti-sh VDR+1,25（OH）2D3,DLV组）。RT-PCR检测各组大鼠的VDR、DDIT4的m RNA表达水平;western blot检测各组大鼠的VDR、DDIT4、TSC2、Akt、mTOR、P70S6K的蛋白及磷酸化表达水平。结果:（1）DN组大鼠VDR及DDIT4的m RNA表达较NC组明显降低,而DV组其表达较DN组明显升高;DL组及DLV组其VDR和DDIT4的表达较NC组明显降低（P<0.05）。（2）DN组大鼠VDR及DDIT4的蛋白表达水平较NC组明显降低,而DV组其表达较DN组明显升高;DL组及DLV组其VDR和DDIT4的表达较NC组明显降低;与NC组相比,TSC2的磷酸化水平在DN组显著下降,而在DV组则显著上升;Akt的磷酸化水平则与TSC2截然相反。同时与NC组相比,mTOR及P70S6K的磷酸化水平在DN组明显升高,而在DV组则明显降低。另外我们还观察到,1,25（OH）2D3对mTOR的抑制作用在VDR基因沉默后消失（P<0.05）。结论:1,25（OH）2D3能够有效诱导DDIT4的表达,并通过其表达抑制mTOR信号通路的活性;1,25（OH）2D3对mTOR的抑制依赖于与其受体VDR的结合。