论文部分内容阅读
目的比较红霉素纳米羟基磷灰石缓释微球(nHA-PHBV-PEG-EM)、红霉素纳米脂质体(EMNP)和氢氧化钙(Ca(OH)2)在体外对粪肠球菌的抑菌杀菌作用,分析其优缺点,为临床推广使用纳米载药微粒作为根管消毒剂提供实验依据。方法1.利用溶剂蒸发法制备nHA-PHBV-PEG-EM,采用乙醇注入-硫酸铵梯度-电机搅拌法制备EMNP,完成后检测纳米载药微粒的形态、粒径、载药量及包封率,并研究其体外释药特性。2.称量一定量成品Ca(OH)2粉剂,加入脑心浸液培养基(BHI)搅拌均匀,制备成氢氧化钙悬浊液。3.采用液体稀释法进行药敏实验,37℃厌氧培养粪肠球菌24小时后,肉眼观测I nHA-PHBV-PEG-EM. EMNP和Ca(OH)2在体外对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并用MTT辅助确定MIC。4.运用液体扩散法比较不同浓度nHA-PHBV-PEG-EM、EMNP和Ca(OH)2在体外肉眼观察下对粪肠球菌抑菌圈的大小,评估纳米载药微粒的抗菌效果。5.制备2.0mg/ml nHA-PHBV-PEG-EM、2.5mg/ml EMNP和3.5mg/ml Ca(OH)2各2ml,加入0.1ml菌液后放入37℃厌氧培养箱内,分别在1天,2天,3天,4天,5天,6天时用灭菌移液枪从试管中取O.1m1液体移植于脑心浸液琼脂培养基(BHIA)上,平行各做三皿,作厌氧培养24h后,记录所得平板菌落数,用统计软件分析处理。结果1. nHA-PHBV-PEG-EM粒径分布较均匀,平均粒径控制在106.6nm,载药量为8.34%,包封率达85.84%,体外释药持续稳定。2.EMNP粒径分布较均匀,平均粒径控制在102.7nm,包封率为82.40%,载药量达8.22%,体外释药持续稳定。3.液体稀释法MIC和MBC实验结果：nHA-PHBV-PEG-EM的MIC为2.5mg/ml, MBC为3.0mg/ml; EMNP的MIC为3.0mg/ml, MBC为3.5mg/ml;Ca(OH)2的MIC为4.0mg/ml,MBC为4.5mg/ml。加入MTT后测得的MIC与液体稀释法所得的MIC相同。4.液体扩散法实验结果：浓度在2.0mg/ml以上的nHA-PHBV-PEG-EM组和EMNP组,及浓度在3.0mg/ml以上的Ca(OH)2组对粪肠球菌的生长均有抑制作用。nHA-PHBV-PEG-EM组与EMNP组比较,其差异性不具有统计学意义(P>0.05)；nHA-PHBV-PEG-EM组与Ca(OH)2组以及EMNP组与Ca(OH)2组,其组间差异具有统计学意义(P<0.05)。5.用药时间对抑菌效果的影响：2.0mg/ml nHA-PHBV-PEG-EM的抑菌作用随时间延长而增强,第5天以后抑菌作用趋于稳定；2.5mg/ml EMNP的抑菌作用随时间变化而增强,具有较佳的缓释效果；3.5mg/ml Ca(OH)2抑菌效果随时间延长而减弱,在第6天时药物作用消失,出现菌落突增现象。结论1.体外抑菌实验表明,nHA-PHBV-PEG-EM、EMNP及Ca(OH)2对粪肠球菌均具有一定抗菌作用。纳米载药微粒的抑菌效果优于氢氧化钙。2. nHA-PHBV-PEG-EM和EMNP具有缓释药物效果,抑菌作用在一定时间范围内随时间增长而增强。