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目的:Twist基因是存在于人、果蝇、鼠等生物体内的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH),作为一种转录因子,主要表达于胚胎中胚层、胎盘及成人的某些中胚层来源的未分化组织。Twist表达的蛋白在人有202个氨基酸、小鼠有206个氨基酸、蟾蜍有166个氨基酸序列构成,其中人类和小鼠的氨基酸序列具有96%的同源性,在不同的种属中其DNA结合区域有着100%的序列保守,所有Twist基因都能结合E-box的DNA序列:CANNTG。Twist基因在转录水平上调控多种基因的表达,最初在胚胎发育过程中,发现它生物学功能,它可以通过促进EMT来调节胚胎的发育。近期研究结果证实Twist参与了多种上皮来源的肿瘤细胞发生上皮-间叶变(EMT)并促进癌细胞侵袭转移,同时Twsit基因在肿瘤进展中可以诱导一系列间充质标志物的产生。研究表明,Twist基因高表达于多种实体瘤中(包括乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤以及骨肉瘤),并能够促进人乳腺癌和黑色素瘤细胞系的凋亡。也有研究证实Twist在人类的乳腺癌、结肠癌、肾癌、胃癌、肝癌、正常肝细胞等6种细胞系中,在结肠癌细胞系中的表达最高,而在正常肝脏细胞的表达最低。目前有研究表明Twist在结肠癌中高表达,但是Twist在不同结肠癌癌细胞系中表达情况如何,尚无具体定论。本研究通过RT-PCR和Western-blot检测Twist在不同结肠癌细胞株中的表达情况,区分出高表达及低表达细胞株,为以后深入研究Twist在结肠癌侵袭转移中的作用奠定基础。
方法:
1、运用RT-PCR方法检测TwistmRNA在结肠癌细胞株SW480,SW620及HCT116中的表达情况。
2、运用Western-blot方法检测Twist蛋白在结肠癌细胞株SW480,SW620及HCT116中的表达情况。
3、统计学分析运用SPSS13.0软件,数据以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。
结果:
1、不同细胞系中TwistmRNA的表达情况
RT-PCR结果显示:HCT116、SW480、SW620三种结肠癌细胞株中的TwistmRNA表达量分别为0.985±0.015、0.506±0.020、0.445±0.025.结果所示:其中在HCT116细胞中的相对表达量显著高于其它两株,组间差异有统计学意义。SW480细胞及SW620细胞中表达依次降低,两组间差别无统计学意义。
2、不同细胞系中Twist蛋白的表达情况
Western-blot结果显示:HCT116、SW480、SW620三种结肠癌细胞株中的Twist蛋白的表达量分别为1.488±0.060、0.751±0.022、0.651±0.030.结果所示:其中在HCT116细胞中的相对表达量显著高于其它两株,组间差异有统计学意义。SW480细胞及SW620细胞中表达依次降低,两组间差别无统计学意义。
结论:Twist基因在三种细胞系中的表达量具有显著性差异,其中在高转移的结肠癌HCT116中存在高水平的表达,表明Twist表达量的高低与肿瘤细胞的类型和同种细胞恶性程度的不同有关,呈现侵袭性越强,表达越高的趋势。