论文部分内容阅读
2017年10月从河南省郑州市三家宠物医院采集了120份宠物狗的肛门拭子样品,通过分离鉴定共获得大肠杆菌菌株106株,采用微量肉汤稀释法检测分离菌株对12种抗菌药的敏感性。结果显示,犬源大肠杆菌对12种药物表现出不同程度的耐药,对β-内酰胺类药物氨苄西林、头孢噻肟、头孢噻呋的耐药率最高均为39.62%,其次是对孢他啶、阿米卡星、庆大霉素、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星的耐药率均在20%～35%之间,而对头孢西丁和粘菌素的耐药率较低分别为3.8%和4.7%。采用PCR扩增及测序证实44株具有头孢噻肟钠耐药表型的大肠杆菌分离株均含有bla CTX-M,4株具有头孢西丁耐药表型的菌株3株含有bla CMY-2,23株含有阿米卡星耐药表型的菌株均含有rmt B,对23株含有氟苯尼考耐药表型全部含有flo R基因,6株具有粘菌素耐药表型的菌株均检测出mcr-1。产CTX型超广谱β-内酰酶包括:一株为CTX-M-3,10株为CTX-M-14,6株为CTX-M-15,1株为CTX-M-24,一株为CTX-M-27,16株为CTX-M-55,7株为CTX-M-65,3株为CTX-M-123。44株携带bla CTX-M基因的菌株通过接合试验共获得26株大肠杆菌的接合子。对26株接合子及其原菌进行了质粒不相容的检测,结果表明,供体菌和接合子中含有最多的质粒类型是FII、I1和FIB。通过系统发育分群分析表明:44株携带bla CTX-M的大肠杆菌中22株属于A群,8株属于B2群,14株属于D群。多位点序列分型（MLST）结果表明:44株大肠杆菌属于29种ST序列,其中有5株属于ST10,4株ST457,3株ST155,ST617、ST224、ST127、ST354和ST1262都是2株,其它ST型都为一株,同时有4株ST型未比对上现有序列。42株大肠杆菌进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）,其中有9个簇,即A、B、C、D、E、F、G、H、I簇,共21株菌,且每个簇内的DNA指纹图相似性均达到85%以上,所以此9簇被分为9个PT,表明了菌株之间存在着一定的克隆传播。剩余的21株菌中其DNA图谱的相似性均为85%以下,则被分为21个PT。一株菌携带blaCTX-M-123和rmt B,且含有FII和I1两种质粒类型,接合子只携带blaCTX-M-123,质粒类型为I1,随后对该菌株进一步进行电转化方法、S1-PFGE、Southern blot杂交和全基因组测序。结果显示,原菌中包含三个质粒,其中blaCTX-M-123位于Inc I1的质粒p HB37-1上,rmt B位于F33:A-:B-的质粒p HB37-2上,还有一个不携带耐药基因质粒p HB37-3上。染色体上含有两个耐药区:第一个是携带blaCTX-M-123耐药区,上游为一个完整的ISEcp1,该片段插入基因组产生两个重复序列（GAGTA）;第二个是由携带tet（A）的不完整的Tn1721,携带整合子(tni A-tni B-sui1-qac E△1-aad A1-dfr A1-inti1和耐汞基因簇（mer RTPCADE）的Tn21,该耐药区位于两个IS1R之间,且IS1R末端含有9bp的重复序列（CGCCGATAA）,推测可能是由于IS1R的插入转座形成了这个耐药区,同时可能会导致这个耐药区的转移和传播。本研究中,大肠杆菌HB37染色体和可接合型质粒Inc I1上均携带有bla CTX-M-123基因,这大大促进了bla CTX-M-123基因的传播和扩散。综上所述,本试验中产ESBLs的大肠杆菌在犬中广泛流行,blaCTX-M基因亚型呈多样性流行,其中还出现了3株携带blaCTX-M-123的大肠杆菌,且首次在HB37质粒和染色体中检测到blaCTX-M-123,上游的基因环境都为ISEcp1,推测可能是由于ISEcp1介导的blaCTX-M-123在质粒和染色体之间转座。通过对44株犬源大肠杆菌进行MLST和PFGE分型分析,发现菌株存在着克隆传播。犬源大肠杆菌多重耐药的菌株的快速传播,这对人类和犬都构成了极大的威胁。