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鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是引起水产动物疾病的重要的条件性病原,鳗弧菌的致病性与其分泌的胞外金属蛋白酶密切相关。本实验室从山东沿海发病海水鱼体中分离得到了鳗弧菌致病株CW-1和CW-4,对牙鲆和大菱鲆有较强的致病性。本论文进行了鳗弧菌胞外金属蛋白酶分离纯化、性质及致病性研究。研究了环境因子对鳗弧菌CW-1和CW-4菌体生长及胞外蛋白酶分泌的影响,结果表明,鳗弧菌最适生长温度为28℃,在37℃时鳗弧菌的生长及胞外蛋白酶的分泌均受到显著的抑制;在28℃下,添加1mmol/L Zn2+和Cu2+培养24h后,鳗弧菌CW-1的菌体生长及其胞外蛋白酶活力下降为83.25%和81.4%,鳗弧菌CW-4的菌体生长及胞外蛋白酶活力下降为71.71%和78.76%;添加Fe3+、Ca2+、Mg2+则对鳗弧菌的生长以及酶活力没有显著影响;在培养基中添加葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等不同碳源物质均能显著促进鳗弧菌的生长,其中以葡萄糖为最高,蔗糖和麦芽糖次之,当葡萄糖浓度为0.5%时,对菌体生长的促进作用最为明显,但添加不同碳源物质对于鳗弧菌胞外蛋白酶分泌均有抑制作用;氨苄青霉素对鳗弧菌的生长及其胞外蛋白酶的分泌有明显的抑制作用;添加金属螯合剂EDTA极显著抑制鳗弧菌的生长及其胞外蛋白酶的分泌,而EGTA对鳗弧菌的生长和胞外蛋白酶表达没有明显影响。用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sepharose 4B凝胶层析方法从鳗弧菌CW-1培养液中分离纯化了胞外蛋白酶,用SDS-PAGE电泳测得蛋白酶的分子量为65.3kDa,用Sephadex G-200凝胶过滤测得蛋白酶的分子量为65.6kDa,表明是一种单体蛋白。1mmol/L的PMSF对酶活性无影响,EDTA能完全抑制酶的活性,表明该酶是一种金属蛋白酶。N-末端氨基酸序列为A E A T G T G P G G N Q K T G,与解蛋白弧菌(Vibrio proteolyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、创伤弧菌(Vibrio vulnificus)金属蛋白酶的N-末端序列有较高的相似性。用DEPC、EDC、DTNB等8种化学修饰剂对鳗弧菌金属蛋白酶进行了化学修饰,结果表明化学修饰后酶的活力发生了改变,其中组氨酸、酸性氨基酸、半胱氨酸残基的化学修饰引起酶活性明显降低,说明组氨酸残基、酸性氨基酸、半胱