论文部分内容阅读
银杏叶(Folium Ginkgo)为银杏科植物银杏(Ginkgo biloba)的干燥叶。又名白果、公孙树、鸭脚树等,属裸子植物银杏门唯一现存的物种,因此被称为植物界的活化石。银杏原产于中中国,现广泛种植于全世界。它有多种用途,可作为传统医学用途和食物。近年来,随着化学检测手段及临床应用的不断深入,银杏叶的制剂工艺、成分分析、药理作用、毒理实验和临床试验等都取得突破性进展。冠突散囊菌(Eurotium cristatum)是茯砖茶(黑茶的一种)的优势菌种,是形成茯砖茶独特品质和风味的主要因素。“发花”是茯砖茶形成其独特品质的关键环节,通过对外在条件的控制,使其优势菌种一—冠突散囊菌生长繁殖,形成子囊菌特有的繁殖器官——闭囊壳,从而使茯砖茶具备独特的品质风味。本文创新性地将茯砖茶中的优势菌——冠突散囊菌置于银杏叶培养基中发酵,而非以往在黑茶提取液中的发酵研究。本研究对比了冠突散囊菌在银杏叶培养基中发酵不同天数后,分别得到不同极性成分的抗氧化活性,同时将发酵后的有效成分提取分离;确定了发酵后某些极性成分的抑菌活性变化;并以氧自由基清除率为指标,探索了最优发酵条件。主要研究结果如下:1考察银杏叶培养基经过冠突散囊菌发酵不同时间后乙酸乙酯提取物的体外抗氧化活性。将冠突散囊菌接种于银杏叶培养基中分别发酵4,7,11,14d后,真空抽滤得到滤液,利用溶剂分级萃取得到提取液,以未发酵银杏叶乙酸乙酯提取液作为对照。结合酶标仪,通过清除DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基能力、ABTS(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐)自由基能力,以及铁还原能力,比较不同发酵天数乙酸乙酯提取物的抗氧化能力。测定了不同天数银杏叶发酵液乙酸乙酯提取物的抗氧化活性,发现11d发酵液提取物抗氧化活性最强,DPPH半数抑制浓度(IC50)105.60mg·-L-1, ABTSIC60102.09mg·L-1更接近Vc的IC50值,同时,lld组铁还原实验的吸光度在不同浓度梯度下均为最大值。2.进一步对发酵11d后发酵液乙酸乙酯部分进行筛分,得到12个组分,通过高效液相色谱(HPLC)和核磁共振(NMR)的方法,从组分7中将目标峰分离。3.对比银杏叶发酵与未发酵萃取物提取物的抑菌活性。利用冠突散囊菌在银杏叶培养基中发酵培养,将得到的发酵液以及未发酵的银杏叶水提物依次进行石油醚、乙酸乙酯的萃取,选取各部位提取物进行对指示菌种(枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌)进行药敏纸片法抑菌试验。选取未发酵部分乙酸乙酯提取物进行最小抑菌浓度的测定。银杏叶未发酵乙酸乙酯提取物对供试菌的抑制作用较显著,而且抑菌活性与样品浓度不成正相关。未发酵乙酸乙酯提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为:2.5、2.5、5.0、10.0g/mL。4.通过对发酵条件pH、温度、含叶量、含菌量、含蔗糖量的探索,以DPPH/ABTS自由基清除率为指标,得出冠突散囊菌在银杏叶培养基中发酵的最优条件范围。