一、研究背景发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV）是2010年在我国首先发现、分离并命名的一种新型布尼亚病毒。该病毒感染引起的发热伴血小板减少综合征（Severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS）是一种新发蜱媒出血热疾病。部分患者在发病前两周内有蜱虫叮咬史,主要临床症状为急性发热、全身乏力、肌肉酸痛、胃肠道症状、白细胞及血小板减少等。SFTSV可感染近乎全年龄段人群,尤其对老年人群威胁更大、病死率较高。在全世界,包括中国、日本和韩国等,SFTS的发病率越来越高,已经引起严重的公共卫生问题。SFTSV感染和导致患者死亡的关键特征是病毒持续复制、血小板严重减少及多脏器功能损害。已有研究对SFTSV潜在致病机制进行了初步探索,但SFTSV的致病机制仍需进一步深入研究。临床上主要对该病患者进行抗病毒感染支持性治疗,并无确证的特异性抗病毒药物。病毒与宿主细胞表面分子结合是其感染细胞的首要环节,而病毒对感染靶细胞具有选择性,就使得病毒只在某些组织或器官中感染,找到病毒的靶细胞成为了一个关键的问题。在蜱媒病毒感染过程中,病毒经蜱虫叮咬皮肤入血,经过与机体免疫系统的斗争,决定机体发病情况。目前,通过体外细胞系、少数SFTS死亡患者尸检样本及免疫缺陷的动物模型对SFTSV靶细胞及致病机制进行了探索性研究,然而对外周血免疫细胞是否能感染SFTSV的研究甚少。研究表明SFTS重症患者表现持续的血清高病毒载量,且患者外周血中白细胞亚群比例发生了明显变化,提示外周血白细胞可能感染SFTSV。最近有研究表明SFTSV可能通过性传播,白细胞是否可以携带SFTSV成为病毒通过睾丸屏障传播的媒介尚未明确。因此确定外周血白细胞能否被SFTSV感染对SFTS的防治具有重要的医学意义。二、实验方法在河南省信阳市SFTS患者治疗定点医院（解放军联勤保障部队第990医院）,采集SFTS患者新鲜外周血样本,以T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、中性粒细胞五种主要免疫细胞为研究对象,采用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）方法鉴定SFTS患者外周血中SFTSV主要感染的靶细胞,比较五种免疫细胞在白细胞中构成比例的变化,分析SFTSV主要靶细胞的亚群构成变化。同时收集SFTS患者的基础信息、化验指标及随访结局资料,进而分析SFTS患者外周血靶细胞与病程进展及预后的关系。在发现SFTS患者外周血SFTSV感染靶细胞的基础上,招募健康志愿者,体外SFTSV感染新鲜外周血,采用FCM方法检测外周血中SFTSV主要感染的靶细胞。根据SFTS患者外周血SFTSV感染靶细胞鉴定结果,分离健康志愿者外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）、原代单核细胞,体外SFTSV感染,FCM分析淋巴细胞、单核细胞感染率以及单核细胞亚群构成比例变化情况。三、研究结果通过对15名SFTS患者及15名同时期健康体检者外周血中T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、中性粒细胞SFTSV感染情况的分析。研究发现,单核细胞SFTSV感染率（14.86%±7.64%）相比T细胞（0.77%±0.74%）、B细胞（2.50%±1.60%）、NK细胞（0.68%±0.91%）、粒细胞（0.00%±.0.00%）最高（P<0.05）;此外,SFTS患者相比健康对照,外周血中中性粒细胞占白细胞（White blood cell,WBC）百分比例升高（P<0.001）,而T细胞、B细胞、单核细胞占WBC百分比例降低（P<0.001,P<0.05,P<0.001）;SFTS患者病毒载量与单核细胞感染率呈正相关关系（R2=0.570,P<0.001）;SFTS患者年龄与单核细胞感染率呈正相关关系（R2=0.97,P<0.001）。收集了98名SFTS患者和39名健康对照的PBMC检测单核细胞亚群比例变化。研究发现,相比健康对照,SFTS患者单核细胞中经典型单核细胞（CD14+CD16-）比例降低（50.05%±20.79%vs.91.74%±3.71%,P<0.001）,中间型单核细胞（CD14+CD16+）比例增加（46.10%±21.06%vs.3.95%±2.08%,P<0.001）;相比SFTS存活患者,SFTS死亡患者的单核细胞中中间型单核细胞比例更高（61.01%±20.30%vs 42.17%±19.34%,P<0.001）。此外,SFTS患者的病毒载量越高或年龄越大,单核细胞中中间型单核细胞比例也越高（P<0.05）。将13名健康志愿者的外周血样本进行体外SFTSV感染,采用FCM方法分析外周血中5个主要免疫亚群（T细胞、B细胞、NK细胞、中性粒细胞和单核细胞）的感染率。相比于T细胞感染率（0.09%±0.30%）、B细胞感染率（1.45%±1.18%）、NK细胞感染率（0.08%±0.27%）、中性粒细胞感染率（0.00%±0.00%）,SFTSV对单核细胞的感染率（8.58%±2.93%）最高（P<0.001）,与SFTS患者外周血中SFTSV主要感染靶细胞结果一致。用SFTSV感染从13名健康志愿者中分离的PBMC和从8名健康志愿者中分离出的纯单核细胞,分析SFTSV感染后单核细胞亚群比例的变化,研究发现SFTSV感染载量越高,单核细胞中中间型单核细胞比例越高（P<0.05）;健康志愿者年龄越大,单核细胞中中间型单核细胞比例越高（P<0.05）。同时通过SFTSV感染8名健康志愿者中分离的PBMC,FCM分选出单核细胞中的经典型单核细胞、中间型细胞,检测胞内病毒含量,研究发现,中间型单核细胞中病毒含量高于经典型单核细胞（P<0.05）。四、研究结论人外周血中SFTSV主要感染的靶细胞为单核细胞,其次为B细胞。病毒感染单核细胞后,单核细胞亚群比例发生显著变化,其中中间型单核细胞比例显著升高,且中间型单核细胞中病毒含量也高。外周血单核细胞的感染率与SFTS患者血清病毒载量及年龄均呈正相关关系。通过对SFTS患者的连续监测与随访追踪,我们证明了经典型单核细胞向中间型单核细胞的表型转变与疾病进展有关,表明了单核细胞在SFTS疾病进展中的重要作用。