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日本沼虾几丁质结合蛋白（Macrobrachium nipponense Chitin Binding Proteins,MnCBPs）是构成表皮的主要结构性蛋白,其基因的表达与蜕皮周期关系紧密,由于CBPs间的相似性较低,且表皮不同的部位MnCBPs表达的时序性差异较大,提示:CBPs在蜕皮周期中的作用不尽相同。实验室前期研究发现,咪唑类物质KK-42处理日本沼虾幼虾,能显著缩短其蜕皮周期的时程。为了初步探究KK-42作用的分子机理,本文依据日本沼虾表皮组织转录组测序结果,筛选出3条新的含有几丁质结合-4（chitinbind4）结构域的MnCBPs,利用PCR技术,从头胸甲表皮组织中克隆到cDNA序列片段,测序长度分别为362、431和1327 bp,按实验室发现的先后顺序命名为MnCBP-6（GenBank:KY126106）、MnCBP-7（GenBank:KY270879）和MnCBP-8（GenBank:MG818722）。生物信息学分析表明,3个MnCBPs均包含RR基序,与其他物种的多序列比对发现,MnCBP-6、MnCBP-7和MnCBP-8分别与阿兹台克端足虫（Hyalella azteca,XP018014406.1）、大型溞（Daphnia magna,JAN65546.1）和埃及伊蚊（Aedes aegypti,XP021699126.1）相似性最高,分别是60%、52%和43%。采用Real-Time PCR方法,测定了蜕皮间期（C）、蜕皮前早期(D0-2)、蜕皮前晚期(D3-4)和蜕皮后期（A）日本沼虾幼虾（体长3.0±0.5 cm）头胸甲、尾扇、游泳足和步足中MnCBP-6、MnCBP-7和MnCBP-8的表达水平,分析了KK-42处理前后上述3个基因表达水平的变化。结果显示,MnCBP-6、MnCBP-7和MnCBP-8的表达水平的变化趋势与蜕皮周期有关,但在表皮组织不同部位其表达模式有差异:MnCBP-6在头胸甲、尾扇和步足中一致,都是在D3-4期和A期高表达,而游泳足中则在D0-2期和A期高表达;MnCBP-7在头胸甲和步足中的表达峰值均在D3-4期,而在尾扇中峰值处于A期,游泳足中则在D0-2期和A期表达较高;MnCBP-8在头胸甲、尾扇、游泳足和步足中的表达趋于一致,峰值均在A期。结果提示,MnCBP-7可能既参与新外表皮又参与新内表皮的形成,而MnCBP-8和MnCBP-6则主要参与新内表皮的形成。KK-42处理后,MnCBPs的表达显著上调,尤其在C期、D0-2期或D3-4期,而且与对照组相比,各基因的表达峰值前移。在C期,头胸甲和尾扇中MnCBP-68、游泳足中MnCBP-8的表达整体显著上调,尤其是尾扇中MnCBP-8在24 h的表达比对照组高301倍;而游泳足中MnCBP-6、MnCBP-7和步足中MnCBP-68只在部分时间点表达上调。在D0-2期,头胸甲中MnCBP-6、尾扇中MnCBP-6、MnCBP-7和步足中MnCBP-6、MnCBP-7的表达整体呈上调效应,特别是尾扇中MnCBP-7在3 h的表达高出对照组有5200倍之多;而头胸甲中MnCBP-7、MnCBP-8及尾扇和步足中MnCBP-8的表达只在个别处理时间表达上调。在D3-4期,上调效应主要发生在游泳足中,MnCBP-6和MnCBP-7的表达相对于对照组整体上调,最为显著的是MnCBP-7在6 h时表达量是对照组的15000多倍,MnCBP-8只在处理后6 h有上调效应。推测KK-42可能通过调节蜕皮激素的浓度间接影响MnCBPs的表达,使峰值前移,推测加快了新表皮的形成,这可能是KK-42显著缩短蜕皮周期时程的机制之一。