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胚胎植入是一个受到时间与空间严格调控的过程,起始于特定的"植入窗口"期,同时,胚泡对子宫的粘附和植入发生在子宫内膜的特定位点一植入位点.成功的植入是母体子宫内膜和胚泡之间相互协调、精确调控的结果,而其分子基础是时空特异表达的功能基因,这在人和灵长类动物中是有待深入研究的问题.我们首先利用恒河猴为研究对象,采用根据cap-finder技术创立的全长cDNA扩增技术和抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)相结合的方法,研究了胚胎植入初始时期子宫内膜植入位点的基因差异表达情况.在准确获取妊娠9.5天恒河猴植入位点和非植入位点子宫内膜后,用SSH法建立了植入位点消减cDNA文库,从中随机挑选了1440个克隆,通过点杂交获得了179个在植入位点高表达的克隆,经测序和与基因库(GenBank/EMBL)比对分析,证实其中102个克隆对应于人或恒河猴的52个同源基因,75个克隆对应于人的58个EST,另外2个克隆没有找到对应的同源基因,推测为新的基因.根据同源基因的功能,将植入位点差异表达基因进行功能分类,发现它们主要与细胞增殖和分化、免疫调节、蛋白质合成以及基因转录调控相关.进一步挑选了其中三个基因进行功能研究初探.差异表达基因中出现频率最高的是蛋白激酶H11;我们先通过cDNA末端快速扩增(RACE)法克隆得到了它的全长cDNA序列,获得Genebank注册号为AY457046;与人的蛋白激酶H11相比,cDNA序列同源性达到96﹪,所编码的蛋白质序列同源性为83﹪.S100A10/P11基因是孙晓阳等前期工作中发现的在恒河猴植入位点高频率出现的差异表达基因,已有的研究发现它能够抑制BAD引起的CHO细胞凋亡过程.本工作发现P11的mRNA主要分布于植入位点腔上皮和部分腺上皮细胞中;而在月经周期子宫中,显著表达于增殖中晚期的腺上皮细胞中;P11在恒河猴植入点和月经周期子宫内膜中的表达方式均与细胞凋亡程度相反,提示它在灵长类子宫内膜中可能发挥抑制细胞凋亡的作用.我们构建了过量表达P11的人子宫内膜癌细胞RL95-2/P11,将进一步在此细胞模型中探讨P11与子宫内膜细胞凋亡的关系.总之,本工作在筛选到围植入期子宫差异表达基因的基础上,研究了几个差异基因在恒河猴和小鼠子宫及母胎界面中的时空表达模式和/或类固醇激素调节方式,由此推测了这些基因在围植入期可能的功能,这将是进一步阐明这些基因功能的坚实基础.