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脂肪酶是一类能催化长链甘油三酸酯水解反应的酶。由于酶技术的快速发展,生物脂肪酶得到了广泛的关注。脂肪酶是一类重要的生物催化剂,在生物技术方面有广泛的应用。目前工业上应用的脂肪酶大多是中温和高温脂肪酶。低温脂肪酶由于具有低温高催化活性等特点,在食品、洗涤、制药、脂类加工等方面有着巨大的应用潜力。本文的目的在于筛选出产低温脂肪酶活力更高的菌株,为今后生产上的应用提供出发菌株,供诱变、基因克隆等研究用。取得成果如下:1.筛选得到80余株产脂肪酶菌株。作者从成都及周边地区汽车修理厂,机油厂、植物油厂、餐厅、菜市场等富含油脂的土壤中,用溴甲酚紫平板筛选得到80余株产脂肪酶的菌株,其中大部分酶活在10—20u/ml范围内。2.筛选得到产低温脂肪酶的高产菌株060805。挑选其中9株酶活较高的菌株,对它们的酶学性质进行初步研究。菌株060805和090902两株为产低温脂肪酶菌株,但是由于菌株060805酶活最高,因此选择该株做进一步研究。3.经过系统鉴定,确定菌株060805为短波单胞菌(Brevundimonas)。菌株060805革兰氏染色阴性,菌落呈橙色、圆形、隆起、不透明、表面光滑、湿润、边缘整齐。电镜观察呈短杆状,单鞭毛,接触酶和氧化酶阳性,不产生吲哚,不产生脂酶(吐温—80),不液化明胶,只发酵麦芽糖。经16s rDNA序列比对,060805菌株与短波单胞菌属(Brevundimonas)的16S rRNA/rDNA序列一致性达到98%以上。因此确定菌株060805为短波单胞菌,并命名为Brevundimonas sp.060805。4.在国内首次报道了短波单胞菌具有产低温脂肪酶的能力。5.建立优化了菌株060805的发酵条件。对菌株Brevundimonas sp.060805的液体发酵条件进行优化,确定其最适发酵培养基碳源为葡萄糖,氮源为蛋白胨,Mg2+浓度为0.05%,发酵温度为28℃,发酵pH为7.0。按1.5%接种量接种于最适发酵培养基中28℃,200rpm,发酵48h,酶活达到23.64u/ml。6.初步确定了菌株060805的酶学特性。对菌株Brevundimonas sp.060805所产的脂肪酶进行酶学性质研究,该酶最适反应温度为35℃,最适pH为6.0,属于低温酸性脂肪酶。该酶具有较好的热稳定性,在60℃下处理60min酶活力基本不变。本文首次报道了短波单胞菌可以产低温脂肪酶,并对其产酶条件及酶学特性进行了初步研究,为今后生产上的应用提供基础,可进行诱变和基因克隆的出发菌株,进行进一步研究。