目的：山羊痘病毒（GTPV)为痘病毒科,羊痘病毒属的一个成员,基因组呈线性,全长约150 kb ,编码147个开放阅读框，是牛、羊等重大传染病重组活疫苗的理想载体。由于插入的外源基因表达量低--启动子转录活性低，本研究旨于构建一个能够高效表达外源基因的山羊痘病毒（GTPV）表达载体。方法：预测GTPV基因组中早期转录因子VETF-l和中期转录因子VITF-3基因序列之间56 bp的一段序列为一双向启动子，两个方向分别命名为Pb56(-)，Pb56(+)。通过PCR技术将该启动子的两个方向分别与绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因融合，构建转移载体，分别命名为Puc-TK12-Pb56(+)-EGFP,Puc-TK12-Pb56(-)-EGFP。用脂质体转染法将2个转移载体以及阴性对照转移载体Puc-TK12-EGFP，标准载体Puc-TK12-P7.5-EGFP分别与GTPV共转染至BHK细胞；采用EGFP报告基因系统通过荧光共聚焦显微镜，流式细胞仪，荧光实时定量PCR等技术鉴定双向启动子并对其活性进行了定量的测定。将布鲁氏菌的外膜蛋白蛋白基因omp25作为外源基因插入到验证好的双向启动子后，构建载体命名为Puc119-TK-Pb56(-)-omp25，通过Western-blotting对外源基因的表达活性进行验证。结果：该基因序列的两个方向均能启动EGFP的表达，初步证实了该基因序列为一GTPV的双向启动子；Pb56(-)，Pb56(+)的转录活性均高于痘苗病毒（VV）的P7.5启动子；外源基因omp25得到了成功表达并且具有免疫原性。结论：筛选出转录活性高于痘苗P7.5启动子的山羊痘病毒自身的双向启动子，为解决外源基因表达量低提供了理论基础。