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目的:在天然、营养、回归大自然的热潮中,人们越来越趋向于使用天然抗氧化剂,从植物资源中寻找安全、高效的天然抗氧化剂成为近年来研究的热点。葡萄籽原花青素(GSPE)是一种具有广泛生物活性,且安全高效的天然抗氧化剂,在功能食品、医药卫生等领域受到极大的关注。研究发现,GSPE在清除自由基、抗氧化,抗动脉粥样硬化,降血脂,抗炎,调节免疫等方面具有广泛的生物学效应。迄今,有关GSPE对糖尿病及其慢性并发症的防治方面的研究甚少,作用机制也尚未明确。本文在以往研究的基础上,通过制备四氧嘧啶大鼠糖尿病模型,从肾功能、抗氧化系统、NO系统等方面进行分析,旨在探讨GSPE对糖尿病,尤其是糖尿病肾损伤的防治作用及其可能机理。
方法:健康雄性SD大鼠,体重160M80g,适应性饲养5天,按体重随机分为正常对照组(10只)、模型组(40只),模型组大鼠禁食12h,按200mg/kg.bw(分两次隔日注射)腹腔注射新鲜配制的4%四氧嘧啶生理盐水溶液,72h后剪尾采血测定空腹血糖,以血糖值(≥)16.7mmol/L并伴有多饮、多食、多尿症状者作为糖尿病(DM)大鼠,不合标准的大鼠弃用。将筛选出的30只DM大鼠按血糖值随机分为DM对照组、GSPE高剂量组(150mg/kgbw)、GSPE低剂量组(50mg/kgbw),每组10只。各组动物自由饮水摄食,GSPE各剂量组大鼠每日灌胃给予GSPE水溶液,正常对照组及DM对照组给予等体积的蒸馏水,共观察6周。实验期间每2周采血测空腹血糖1次,每周称重1次。至实验期末,将动物置于洁净代谢笼,收集24h尿,记录体重后,乙醚吸入麻醉,心脏采血,离心分离血清测定尿素氮(BUN)、肌酐(Cre)等肾功能指标及血清总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS);并剖取双肾,准确称重,制备lO%肾组织匀浆及提取’肾脏线粒体,测定组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、NO含量和NOS活性,肾脏线粒体活性氧(ROS)生成及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。
结果:(1)GSPE对糖尿病大鼠血糖的影响实验期间,DM对照组大鼠血糖维持在较高水平,远高于正常组大鼠血糖,GSPE组大鼠血糖水平与DM组比较差异无显著性(p>0.05)。(2)GSPE对糖尿病大鼠体重、肾重指数及肾功能的影响DM对照组和GSPE剂量组大鼠的体重均明显低于正常组(p<0.01)。DM对照组大鼠的。肾重指数、肌酐清除率(CCr)、24h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、均较正常组大鼠有明显升高(p<0.01)。GSPE高剂量组大鼠的肾重指数、CCr、24h尿蛋白、SCr低于DM对照组,GSPE低剂量组大鼠的CCr、24h尿蛋白、BUN亦低于DM对照组,差异均有显著性。(3)GSPE对糖尿病大鼠抗氧化酶活性、脂质过氧化反应及肾脏线粒体活性氧生成的影响与正常对照组比较,DM对照组大鼠血清总抗氧化能力(T-AOC)、肾组织SOD、GSH-Px活性明显降低,肾组织MDA含量明显升高,-肾脏线粒体的活性氧(ROS)生成亦明显高于正常组大鼠,差异均有显著性。而GSPE高剂量组大鼠’肾组织SOD、GSH-Px活性较DM对照组明显升高,MDA含量明显降低,。肾脏线粒体内ROS生成亦低于DM对照组,差异均有显著性。(4)GSPE对糖尿病大鼠肾脏线粒体ATP酶的影响与正常对照组比较,DM对照组大鼠肾脏线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+一ATP酶活性明显降低(p
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