对虾白斑综合症(white spot syndrome,WSS)是由白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)感染甲壳动物,尤其是对虾引发的一种严重的疾病。此前的研究结果显示,接种WSSV疫苗可有效地保护对虾感染WSSV所致的死亡。然而,疫苗注射接种在对虾养殖中难以应用。因此,通过对虾口服接种抗WSSV疫苗成为研究的焦点。枯草芽孢杆菌是一种非致病性的革兰氏阳性菌,常被用于人类食品或动物饲料的添加剂。在营养缺乏或其他胁迫条件下,枯草芽孢杆菌能形成具有抗逆性的休眠体—芽孢。由于芽孢具有独特的抗逆性,在极端的温度、干燥、以及暴露于有机溶剂和其他毒性化学物质等不利条件下能长期存活。因此,芽孢成为在极端环境中运载外源抗原蛋白或具有活性的生物大分子的潜在有效载体。本研究的目的是通过芽孢表面展示技术将具有保护作用的WSSV抗原展示在芽孢表面,构建具有抗WSSV作用的表面展示WSSV抗原的重组芽孢。本研究的内容和结果包括4部分:第一.以CotX为分子载体,以编码GFP的gfp为报告基因的重组芽孢表面具有GFP绿色荧光。证明枯草芽孢杆菌的芽孢衣壳蛋白CotX位于芽孢衣壳外层,可作为芽孢表面展示外源蛋白的载体分子。第二.将芽孢衣壳蛋白基因cotX与WSSV囊膜蛋白基因vp19和vp28重组,构建了融合表达CotX-Vp19和CotX-Vp28的整合型重组质粒pJS747和pJS748。第三.融合表达Vp19或Vp28整合型重组质粒转化Bacillus subtilis168,得到重组菌株DRJS747和DRJS748。诱导重组菌株产生的芽孢表面展示Vp19或Vp28。第四.以构建的重组芽孢口服接种克氏螯虾,接种后以WSSV进行攻击试验,分析克氏螯虾的相对存活率。结果显示口服重组芽孢后的克氏鳌虾具有抗WSSV感染致死作用。本研究的主要结论包括:1.枯草芽孢杆菌的芽孢衣壳蛋白CotX位于芽孢衣壳外层,可作为芽孢表面展示外源蛋白的载体。2.表面展示Vp19或Vp28的重组芽孢可以作为对虾抗WSSV感染的口服免疫制剂,表面展示外源抗原蛋白的重组芽孢为控制WSSV和其他甲壳动物病原菌的口服免疫制剂提供了新的思路。