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胰腺癌恶性程度极高,发病隐匿,预后不良。由于缺乏有效的早期诊断方法,手术切除率很低,且对常规放化疗不敏感,因此寻找有效的早期诊断标记物和新的治疗靶标是解决这一难题的主要方法。国内外目前已有数个基因芯片研究数据结果提示骨桥蛋白是在胰腺癌中表达明显上调的基因。在前期研究的基础上,我们通过对OPN基因在胰腺癌中的表达与胰腺癌临床病理特征和预后的相关性以及对OPN基因功能的初步研究,以求对胰腺癌的早期诊断和基因治疗提供理论依据和实验基础。研究方法(一)采用免疫组织化学法检测76例胰腺癌、15例胰腺良性肿瘤和11例正常胰腺组织中OPN基因的表达,应用Werstern blot方法检测10例胰腺癌和癌旁正常胰腺组织中OPN的表达,应用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)检测6例胰腺癌中OPN的表达情况,探讨OPN在胰腺癌中的表达及与临床病理特性的关系。(二)利用已构建的pcDNA3.1-OPN重组质粒,在胰腺癌细胞株CFPAC-1中进行转染,筛选稳定转染的细胞,观察细胞形态的变化,用流式细胞分析对细胞周期和凋亡的影响,MTT法检测细胞生长曲线的变化,黏附试验观察细胞与细胞、细胞与基质之间黏附力的变化。(三)构建胰腺癌组织芯片,免疫组化法检测PTEN、P27、VEGF在胰腺癌中的表达及其相关性,单因素及多因素分析探讨相关蛋白表达对预测胰腺癌患者预后的价值。研究结果(一)免疫组织化学结果示:胰腺癌组织中OPN阳性表达率明显高于胰腺良性肿瘤和正常胰腺组织,与胰腺癌的淋巴结转移呈密切相关性。RT-PCR和Wersternblot方法示:与胰腺良性肿瘤和正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中OPN存在高表达。OPN基因可作为胰腺癌诊断的辅助实验室指标。(二)成功建立了稳定转染OPN的胰腺癌细胞系,与转染空载体的胰腺癌细胞系和亲本细胞相比,在细胞形态、生长曲线、细胞周期方面无明显差异性,但细胞间黏附力降低、细胞与细胞外基质的黏附力也降低。(三)免疫组织化学结果示:胰腺癌组织中VEGF的阳性率明显高于胰腺良性肿瘤和正常胰腺组织,PTEN、P27阳性表达率明显低于胰腺良性肿瘤和正常胰腺组织。OPN与VEGF表达有显著相关性,但与PTEN、P27无明显相关性。单因素分析示OPN与VEGF与胰腺癌患者的预后有显著相关性(P＜0.05),其阳性表达预示患者预后较差;P27、PTEN与患者预后无明显相关性(P＞0.05)。多因素Cox回归分析提示OPN是影响患者预后的独立因素。