副溶血性弧菌在河口环境中无处不在,在海鲜产品中很常见。副溶血性弧菌引发人们产生腹泻、呕吐、发烧等临床症状,更严重者会出现反应性关节炎、心脏病等,与食用受污染的海鲜有关,特别是牡蛎、三文鱼等未经加工的食品。给人类健康造成了巨大的威胁。为了应对这些疾病的产生,特别是在1990年代,开发了几种免疫分子检测的方法,可以用于快速检测和定量副溶血性弧菌。使用分子生物学的方法区分副溶血性弧菌的临床菌株和环境菌株,准确鉴定和表征海鲜中副溶血性弧菌以及对致病性与非致病性菌株的毒力因子的检测,旨在控制由副溶血性弧菌引起的食品安全进行风险评估。研究主要利用动物感染模型和体外消化系统模拟来探究其感染致病机理,通过人体胃肠道模型来模拟其在胃肠道环境下的耐受性及致病性;为解决食源性致病菌引发的食品安全问题提供了科学依据。因此本文旨在:1)运用体外静态消化模型,研究了50株不同来源的副溶血性弧菌在人工模拟胃液中生长的异质性影响,2)研究了不同来源的副溶血性弧菌的生长变异系数CV值的变化以及对生长异质性的影响,3)进一步从基因角度研究了不同的基因型对表型生长异质性的影响,4)运用流式细胞仪检测致病性副溶血性弧菌的存活状态。本课题研究内容及实验结果如下:1.人工模拟胃液下副溶血性弧菌生长异质性的研究目前尚无研究表明,致病性和非致病性副溶血性弧菌在人的环境（如胃液和肠液）中具有生长异质性。tlh基因存在于致病性和非致病性副溶血性弧菌中,而tdh和trh基因仅存在于致病性菌株中。首先应用模拟的人类胃液来探索50株副溶血性弧菌在37°C下的生长变异性。用数学修正Gompertz模型拟合菌株生长曲线,并计算最大比生长速率(μ_max),延滞期（LT）及其变异系数（CV）值,比较了致病性和非致病性副溶血性弧菌对模拟人胃液环境下的应激反应。结果表明,经模拟胃液处理后致病性菌株的μ_max显著增加（P<0.01）,延滞期显著缩短（P<0.05）,非致病性菌株的μ_max显著增加（P<0.01）,延滞期显著延长（P<0.05）。同时,基因型（tlh⁺/tdh⁺/trh^-）的CV显著增加（P<0.05）,表明致病性基因型（tlh⁺/tdh⁺/trh^-）菌株对模拟胃液具有较强的耐受性。结果表明致病性副溶血性弧菌菌株对模拟胃液环境表现出很大的抗逆性和生长异质性,对食源性致病菌的有效控制提供了新的见解。2.人工模拟胃液条件下副溶血性弧菌生物被膜异质性的研究在模拟胃液环境下,研究了六株致病性和非致病性的副溶血性弧菌VPC40、VPC89、VPC90、VPE05、VPE37、VPE49。观察各个菌株在2h、8h、12h、24h生物被膜的形成情况。六株不同致病性的副溶血性弧菌通过结晶紫染色法测定生物被膜的形成动态。结果表明,经人工模拟胃液处理后,VPC40、VPC89、VPC90、VPE05、VPE37、VPE49的生物被膜较纯培养时生物被膜量均显著增加（P<0.05）。六株菌株在培养2h时生物被膜生长的速度缓慢,培养8h时生物被膜量生长的速度显著增加（P<0.05）。致病性副溶血性弧菌生物被膜量的增加,是菌株应对外部恶劣环境做出的快速响应,给人类健康造成了极大的威胁。3.人工模拟胃液条件下致病性副溶血性弧菌的检测应用通过流式细胞仪,研究了致病性副溶血性弧菌在人工胃液下2h、6h、12h活菌数的变化过程,与传统平板计数法相比。结果表明流式细胞仪与平板计数法相比具有明显的相关性,能很好区分在培养过程中副溶血性弧菌在人工胃液的活菌数量,在培养2h时绝大多数经胃液处理后的菌株是活菌株,因此会出现大片红色荧光PI的阴性区域。随着培养时间的增加,剩下的菌悬液死菌数逐渐增加,红色荧光PI阴性区域逐渐变化,红色荧光（SYTO）阳性区域面积有所增加。运用流式细胞仪检测均在2h之内完成,大大缩短检测时间,对食源性致病菌的快速检测提供了科学有效的方法。本论文研究了在模拟胃液环境下,四种不同基因型的致病性和非致病性副溶血性弧菌的最大比生长速率的差异。结果显示,经模拟胃液处理后87%致病菌株的μ_max显着增加,非致病菌株的89%的μ_max是显着降低。同时,基因型（tlh⁺/tdh⁺/trh^-）的CV值显著高于其他基因型（tlh⁺/tdh^-/trh^-,tlh⁺/tdh^-/trh⁺和tlh⁺/tdh⁺/trh⁺）的CV值（P<0.05）。因此,需更加重视与毒力因子有关的临床基因型（tlh⁺/tdh⁺/trh^-）。致病性菌株的生物被膜量明显高于非致病性菌株的生物被膜量,在培养12h时变异系数CV值达到峰值18.1。本文结果将有助于更好的分析菌株的异质性,对预测微生物学和食品风险评估提供了有效的方法和理论依据。