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蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B)作为蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)家族中的一员,是一类信号传导酶,胰岛素信号的调节可通过胰岛素受体底物-1(IRS-1)和胰岛素受体底物-2(IRS-2)的脱磷酸化作用而实现,有实验证实,将PTP1B基因敲除可使小鼠体重不增长,因此,PTP1B作为胰岛素的负调控因子在信号传导方面的作用,目前已成为公认的治疗II型糖尿病和肥胖症的作用靶点。从海藻中提取的卤代苯酚化合物,通常具备多样的生物活性,如细胞毒素活性,抗菌活性,抗氧化活性,抗肿瘤活性等。本课题组成员通过对该类化合物结构分析发现,小分子卤代苯酚类化合物通过杂环化合物(如2,4-噻唑烷二酮、海因,结构如下)结构修饰,能够对PTP1B的活性产生较为明显的抑制性。本文拟以此类化合物为先导物,合成一系列结构类似的溴代苯酚杂环化合物。1、溴代苯酚化合物的合成。结合参考文献对反应条件进行了摸索,设计出较为合理的路线。产率达到70%以上,完成了对目标化合物的合成,并对合成的化合物经过1H-NMR、13C-NMR、DEPT谱进行了结构鉴定,并证实了所合成化合物结构的正确性。实验结果表明,该合成方法不仅产率较高,而且后处理较为简单,少数化合物通过硅胶柱的分离能够得到所需结构的目标化合物。2、酶活力测定方法的建立与抑制活性的测定。通过对PTP1B的Time-course曲线、最适pH、底物(pNPP)浓度对反应速率曲线的测定以及Lineweaver-Burk双倒数曲线的绘制,得出如下结论：PTP1B的反应速率(以t-OD作图得到的曲线斜率)只在最初一段时间内保持恒定,随后反应速度逐渐下降,最后趋于平衡；选反应前3 min来表示PTP1B的活性为0.156 OD/min; PTP1B的最适pH值为6.5。以%Inhibition值作为化合物抑制能力的评判标准,即固定PTP1B-底物的反应体系,改变化合物的浓度,将反应前3 min的OD40s值与未加化合物的体系对比。对合成的12个化合物进行了抑制活性的测定,结果表明,有2个抑制活性较好的化合物,分别为5-(5,6-二溴-3甲氧基-4-羟基苯亚甲基)-2,4-噻唑烷二酮、5-(5,6-二溴-3甲氧基-4-羟基苯亚甲基)-2,4-咪唑烷二酮,其%Inhibition值分别为32.80、27.79。3、体外PTP1B酶抑制活性测定及构效关系研究。米氏常数的测定,随着底物pNPP浓度的增加反应速率逐渐增加,在pNPP达16mM以上时,反应速率基本趋于最大值,米氏常数Km为1.4 mM,并测定了阳性抑制剂钒酸钠和化合物12的抑制类型,结果显示,两个化合物对PTP1B均为竞争性抑制,其Ki值分别为33μM、60μM。