研究背景:在宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌并称的妇科三大恶性肿瘤中,宫颈癌发病率位居首位,且大部分患者出现在发展中国家,每年全球约有27万人死于此病,这给女性的健康及生命带来了严重的威胁。虽然在宫颈癌中宫颈腺癌比宫颈鳞癌少见,但与鳞癌相比,腺癌的预后差、死亡率高,而且近些年宫颈腺癌的发病率较前增加并有年轻化的趋势。因宫颈腺癌对放疗的敏感性低,故化疗被予以重视。目前宫颈腺癌的化疗方案仍是以铂类抗癌药物为基础,既往以顺铂为主。而近些年发现卡铂与顺铂在宫颈癌的抗肿瘤效果方面无明显差异,但其肾毒性、消化道反应、神经毒性等不良反应明显小于顺铂,所以在宫颈癌化疗中优于顺铂,这一点国内外文献均有报道。卡铂(CBP)属于第二代铂类化合物,1980年被发现,1990年在我国批准生产并应用于临床。卡铂是通过改变肿瘤细胞DNA的化学结构而影响细胞复制,从而起到抗肿瘤作用。虽然其不良反应小于顺铂,但是其毒副作用及耐药性依旧限制了临床的用药剂量,因此探索新型的药物进行抗肿瘤治疗或增强现有化疗药物的敏感性成为宫颈腺癌化疗研究的热点。雷帕霉素(RAPA,又名西罗莫司)是一种大环内酯类抗生素,它的抗真菌作用及低毒性特点最先在实验中被发现,其后又有实验证实了其免疫抑制以及预防冠脉支架植入后血管再狭窄等作用。而同时雷帕霉素对晚期肾癌、乳腺癌、复发性胶质母细胞瘤、骨肉瘤、晚期非小细胞肺癌等恶性肿瘤也有显著的抗肿瘤作用,并可以增加其它抗癌药物的敏感性。因此我们推测雷帕霉素作为一种抗肿瘤药物对宫颈腺癌亦有杀伤作用,在它与卡铂的联合用药中二者具有相互促进作用,可以增加卡铂的抗肿瘤效果。目的:观察雷帕霉素(RAPA)及卡铂(CBP)在单独和联合给药下对Hela细胞增殖、凋亡、细胞周期阻滞等方面的影响,从而为宫颈腺癌化疗寻求新药,以及增加现有化疗药物的敏感性提供理论依据。方法:(1)MTT染色法检测雷帕霉素、卡铂单独及联合应用对宫颈腺癌Hela细胞增殖的影响。(2)流式细胞术PI染色法检测雷帕霉素、卡铂单独及联合应用对宫颈腺癌Hela细胞周期分布的影响。(3)Annexin V-7AAD双染法检测雷帕霉素、卡铂单独及联合应用对宫颈腺癌Hela细胞凋亡的影响。(4)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测雷帕霉素、卡铂单独及联合应用对宫颈腺癌Hela细胞中Bcl-2/Bax基因表达的影响。结果:(1)MTT染色法检测结果显示:雷帕霉素、卡铂单独应用时对宫颈腺癌Hela细胞的增殖有抑制作用,呈一定的时间依赖性,且卡铂的抑制效果优于雷帕霉素;雷帕霉素与卡铂联合应用组增殖抑制率高于雷帕霉素、卡铂单独应用组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)流式细胞术(FCM)PI染色法检测结果显示:雷帕霉素、卡铂单独应用时可使宫颈腺癌Hela细胞中G1期细胞比例增加,S期与G2期细胞比例减少,呈一定的时间依赖性,且卡铂的作用效果优于雷帕霉素。雷帕霉素与卡铂联合应用组作用效果优于雷帕霉素、卡铂单独应用组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(3)Annexin V-7AAD双染法检测结果显示:雷帕霉素、卡铂单独应用时对宫颈腺癌Hela细胞的凋亡有促进作用,呈一定的时间依赖性,且卡铂的促进效果优于雷帕霉素;雷帕霉素与卡铂联合应用组凋亡率高于雷帕霉素、卡铂单独应用组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(4)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测结果显示:雷帕霉素、卡铂单独应用时可使宫颈腺癌Hela细胞中促进凋亡的Bax基因的表达增加、抑制凋亡的Bcl-2基因的表达降低,呈一定的时间依赖性,且卡铂的作用效果优于雷帕霉素。雷帕霉素与卡铂联合应用组作用效果优于雷帕霉素、卡铂单独应用组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)雷帕霉素、卡铂单独应用时均可对宫颈腺癌Hela细胞起到抑制其增殖、诱导其凋亡的作用,并与作用时间呈正相关,提示二者对宫颈腺癌可能均有抗肿瘤作用,且卡铂的作用效果优于雷帕霉素。(2)雷帕霉素与卡铂联合应用时,其对Hela细胞的作用效果优于雷帕霉素、卡铂的单独给药,二者在抑制Hela细胞增殖、诱导Hela细胞凋亡上具有协同促进作用,以此推测雷帕霉素可以增强卡铂在宫颈腺癌中的化疗效果。(3)雷帕霉素、卡铂对宫颈腺癌Hela细胞的抗肿瘤作用机制及相互的协同促进作用可能与阻滞细胞周期进展、降低凋亡基因Bcl-2/Bax的表达有关。