水稻稻曲病人工接种技术及病菌遗传多样性研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 14次 | 上传用户:luckylzh_luo
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由稻曲病菌(Ustilaginoidea virens (Cooke) Tak)引起的水稻稻曲病(Rice FalseSmut)是水稻的一种穗部病害,这种病害不仅危害水稻的产量和品质,其病菌还能产生使人畜致畸甚至致死的毒素。近十年来,稻曲病已成为各个稻区的主要病害并有日益严重的趋势。为了解稻曲病菌的生物学特性,从不同培养基、温度、pH值等方面对稻曲病菌生长和孢子萌发进行研究。结果显示,PSA培养基适合稻曲病菌生长,菌丝生长、厚垣孢子和分生孢子萌发最适合的温度为28℃,最适pH为6。在15℃33.5℃和13℃23℃自然变温条件下分生孢子48h萌发率为81.79%和44.20%,冰箱4℃放置168h后使分生孢子在28℃条件下48h的萌发率下降了43.38%,病菌在36℃42℃条件下处理16h后,研究结果表明,随着处理的温度升高和时间的延长,菌落平板长势变差,菌落直径变小,40℃以上处理的分生孢子均不萌发,41℃处理4h以上的厚垣孢子均不萌发。稻曲病菌在PSB中培养到第13d菌丝干重最大为16.48mg.mL-1,培养9d的分生孢子数量最多,孢子量为4.19×106/mL。然而随着培养时间的增加,培养液中菌丝的干重、孢子数量和菌液pH值明显下降,并会抑制水稻种子发芽。水稻品种两优培九、甬优6号和汕优63孕穗期和浆初期的稻穗匀浆液对分生孢子的萌发有促进作用,而对厚垣孢子的萌发有抑制作用。测定来源于福建省不同地区102个菌株的菌丝生长速率、产孢数量及分生孢子萌发率,结果表明,供试各菌株菌丝生长速率范围在(28.7mm/15天45mm/15天)之间,产孢量在2.5×104个/mL2.4×107个/mL之间,分生孢子萌发率在9.00%97.5%之间。为了研究提高稻曲病人工接种成功率的方法,温棚条件下在水稻孕穗中期采用注射方法进行接种。分别从稻曲病菌不同接种体、培养时间、接种浓度、接种时期以及不同年份等方面进行接种效果的比较。使用马铃薯蔗糖液体培养基来培养病菌作为接种体,穗的发病率为100%。病菌在PSB培养基中培养57天接种效果较好。接种的分生孢子浓度越低水稻病穗率和病粒数也越少。在水稻品种两优培九孕穗中后期,使用含分生孢子浓度为4×106个/mL的病菌PSB培养液进行注射接种,穗发病率达到100%。水稻孕穗期叶耳距为89cm时接种,发病效果最好。喷淋处理能明显提高水稻稻曲病的接种效果。供试的6种水稻品种中,两优培九品种的发病最重,Ⅱ优明86发病最轻,采用室内人工注射接种和田间自然诱发法对福建省15个水稻新品种进行抗病性测定。结果表明,人工接种水稻的发病效果优于田间,其平均病穗率和病粒数分别为36.56%和4.21粒,温棚条件下建立的稻曲病人工接种技术能获得稳定有效的发病效果,并能区别水稻品种间的抗性差异。为了研究福建地区稻曲病菌的遗传多样性与水稻品种、水稻生长季节以及地理分布的关系,本研究采用RAPD-PCR(Random Amplified PolymorphicDNA-Polymerase Chain Reaction)的方法对采集自福建19个县市的水稻生产区的102个稻曲病标本进行研究,并进行了聚类分析。使用的RAPD随机引物在不同菌株共扩增157条带,多态性条带比率为82.17%,遗传距离范围为0.020.66。在遗传距离0.349水平上,划分出7个遗传聚类组,聚类组R1为优势聚类组包含了80个菌株。在遗传距离0.330水平上,来自宁化的10个菌株被划分成早稻群体和晚稻群体。初步认为菌株的地理来源、水稻品种、生长季节以及生长年份都是影响福建省稻曲病菌遗传多样性的主要因素,对稻曲病的遗传变异起着较大的影响作用。
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