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目的:研究脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells,ADSCs）联合缓释转化生长因子-β1（Transforming growth factor-beta1,TGF-β1）的羟基磷灰石（Hydroxyapatite,HA）纳米微球/明胶海绵复合支架构建ADSCs-HA纳米微球复合物修复兔膝关节创伤性软骨缺损的效果。方法:（1）制备载有细胞因子TGF-β1的HA纳米微球,电镜分析其微观形貌,通过模拟体液的浸泡实验检测TGF-β1的缓释浓度及持续时间。（2）从3月龄新西兰大白兔的脂肪组织提取ADSCs,传代培养,观察细胞形态及流式细胞仪鉴定。（3）将HA纳米微球附着可吸收明胶海绵内构建HA纳米微球/明胶海绵复合支架,取第3代ADSCs以1×105个细胞/mL的浓度接种HA纳米微球/明胶海绵复合支架共培养,构建ADSCs-HA纳米微球复合物,行MTT检测及电镜观察。（4）选用18只3月龄的雌性新西兰大白兔制作兔膝关节创伤性软骨缺损动物模型:用电钻在股骨髁间滑车上做一直径为4.5 mm、深3 mm圆柱形软骨缺损。造模成功的新西兰大白兔中取18只随机平均分为3组,分别为A组（软骨缺损处植入ADSCs-HA纳米微球复合物）;B组（软骨缺损处植入HA纳米微球/明胶海绵复合支架）;C组（空白对照,仅软骨缺损无植入物）。（5）术后12周进行兔膝关节软骨缺损修复效果检测,大体观察:兔膝关节软骨修复区与周围正常组织是否交界分明,修复组织质地如何;取兔膝关节软骨缺损修复区组织切片,行免疫组化染色观察Ⅱ型胶原的表达,行甲苯胺蓝染色组织中的葡聚糖表达;Western Blot法检测修复组织Ⅱ型胶原的表达量;Wakitani评分评估软骨缺损修复效果。结果:（1）成功制备载有TGF-β1细胞因子的HA纳米微球,电镜观察微球呈近似球形,平均粒径约为8.85μm±3.48μm,微球之间易相互聚集,存在粘附性;通过ELISA检测得出微球内TGF-β1可持续缓慢释放29天,27天内维持有效浓度。（2）从兔腹股沟皮下脂肪组织分离提取脂肪干细胞并传代培养,流式细胞检测细胞表面抗原CD90、CD29表达分别为59.74%、42.90%,CD45、CD14表达为1.27%、0.86%。（3）HA纳米微球/明胶海绵复合支架联合ADSCs共培养3天,电镜观察示支架内HA纳米微球散在分布,细胞附着生长。MTT检测提示HA纳米微球/明胶海绵复合支架内ADSCs生长增殖状况良好。（4）模型关节共18例,术后切口无感染,移植物均无脱落,术后兔活动及饮食正常。12周后C组可见少量的纤维组织生长,未见软骨细胞填充;B组修复组织表面不光滑,植入的支架不能与周围的组织完全融合,缺损区域边界清晰可见,修复组织甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,但较少见软骨细胞结构;A组修复区域光滑平整,支架已被吸收,修复组织与正常软骨组织边界尚清,修复组织甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,可见软骨细胞生长但排列较正常组织紊乱。Western Blot检测及Wakitani评分统计学分析:WB检测II型胶原蛋白相对灰度值结果分别为A组0.437±0.103、B组0.325±0.076、C组0.175±0.045,三组样本间II型胶原蛋白相对灰度值差异均有显著性（P<0.05）,其中A组与C组、B组与C组之间结果差异更显著（P<0.01）。Wakitani评分结果为A组5.50±2.59、B组8.83±2.79、C组11.50±1.05,B组和C组的Wakitani评分无显著差异（P>0.05）。A组与B组、A组与C组之间评分结果存在显著差异（P<0.05）。结论:本实验中HA纳米微球的TGF-β1体外缓释作用良好;构建的HA纳米微球/明胶海绵复合支架在软骨缺损治疗中具有应用前景;ADSCs-HA纳米微球复合物能定向成软骨细胞分化,为组织工程修复软骨缺损提供理论依据。