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目的:探讨叶下珠提取物在不同剂量下作用于体外培养的人肝癌细胞株BEL-7404的效果,摸索其对肝癌细胞诱导凋亡及杀伤作用的最佳剂量,并进一步从分子水平研究叶下珠抑制肝癌细胞作用可能的机理,为将叶下珠开发为又一种有效的抗癌药物打下基础。方法:采用流式细胞仪TUNEL法检测叶下珠提取物诱导BEL-7404细胞凋亡情况;采用光镜观察体外培养的BEL-7404细胞在叶下珠提取物处理后形态学的变化;通过流式细胞PI法检测叶下珠提取物对BEL-7404细胞的杀伤性;应用流式细胞术检测细胞CasPase-3的活化程度;利用细胞免疫化学法测定叶下珠提取物处理人肝癌BEL-7404细胞后一些与细胞凋亡密切相关蛋白质的表达情况。结果:(1)流式TUNEL法检测300μg/mL、500μg/mL叶下珠提取物作用于BEL-7404,可使细胞凋亡率达到(22.1±9.4)%,(21.6±8.3)%。(2)显微镜观察:浓度≥300μg/mL浓度的叶下珠提取物处理的BEL-7404细胞内细胞液较为浑浊,大部分细胞呈圆形或近圆形,体积较正常细胞减小,多数不能贴壁生长,细胞碎片、悬浮和脱落的细胞大量的出现,并且细胞克隆生长状态散开。(3)在300μg/mL-1000μg/mL浓度范围内,随着浓度升高叶下珠提取物对BEL-7404细胞有杀伤作用逐渐增强。(4)通过检测CasPase-3的活性表明,其随着叶下珠提取物浓度的增加而明显活化。(5)经过叶下珠提取物处理BEL-7404后,免疫细胞化学结果显示,Bcl-2蛋白表达量下降,Bax、Apaf-1蛋白表达量升高。结论:(1)叶下珠提取物对BEL-7404细胞有较为明显的杀伤作用,并且能够诱导其凋亡。(2)叶下珠提取物可激发CasPase-3的活性并促进其自我激活,增强了Bax和Apaf-1这两种促进肝癌细胞凋亡的蛋白的表达,减弱能够抑制肝癌细胞凋亡的Bcl-2蛋白表达。(3)叶下珠有着被进一步开发为抗肝癌药物的潜力。