基于一珠一物法结合细胞膜色谱对短链抗菌肽的制备及其应用研究

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抗生素的耐药性是一个影响全球健康的重要问题,具有强烈的社会和经济影响,新的抗菌剂的开发迫在眉睫。在这方面,抗菌肽(AMP)似乎是解决此问题的新选择。AMP的作用机制涉及细胞内靶标和膜破坏。抗菌肽具有广谱抗菌活性,可以快速治疗和杀死各种靶标,包括革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、真菌和肿瘤细胞。因此AMP对抗生素抗性细菌、原生动物、酵母和真菌能够发挥有效作用。重要的是,由于它们不与特异性受体结合,因此AMP不易产生耐药性。本课题结合细菌膜色谱法和一珠一物法,开发了一种膜色谱填料,并成功地将其用于抗菌肽的筛选,筛选出的抗菌肽具有优异的抗菌特性。主要工作如下:1.我们成功地制备了一种细胞膜色谱填料。采用改进的St?ber法,获得平均粒径约4μm的二氧化硅微球。然后合成出一种水溶性的光敏高分子重氮树脂(DR),利用DR将细菌的细胞膜修饰到二氧化硅微球表面实现对硅球的功能化改性。2.利用该膜色谱填料成功筛选出具有抗菌特性的短肽。筛选出的抗菌肽为Alanine-Valine-Glycine-Alanine-Valine(AVGAV)。研究了抗菌肽的抗菌性能和最小抑菌浓度(MIC)。发现该抗菌肽对多种细菌具有抗菌性,包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌、副伤寒沙门氏菌B、表皮葡萄球菌,且最小抑菌浓度值分别为150μg/m L、250μg/m L、200μg/m L、700μg/m L、500μg/m L、800μg/m L。并且在不同的p H、煮沸加热、胃液环境和氧化条件下,该抗菌肽具有较好的稳定性能。3.抗菌肽具有良好的生物相容性。当抗菌肽浓度完全抑制大肠杆菌生长和繁殖时,对小鼠成纤维细胞(L929)并没有表现出明显的细胞毒性。通过豚鼠皮肤实验证明了该抗菌肽对皮肤既无刺激反应、也无皮肤变态反应性。在急性经口毒性试验中,大鼠两周内仍保持健康。在小鼠伤口细菌感染模型中,展现了优异的抗菌和促进伤口愈合的效果。4.该抗菌肽能够抑制细菌产生耐药性。在亚致死浓度下,进行细菌传代培养的实验,抗菌肽在细菌传代14代之内,其对于细菌的最小抑菌浓度没有出现变化。然而在第7代,对应的抗生素开始出现耐药性。5.在文献报道的方法基础上,采用3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS)对硅胶粉末进行了改性,成功地制备了柱层析硅胶粉。与商业硅胶粉相比,自制的改性硅胶粉在分离噻吩物质具有更好的分离效果,有望在抗菌肽和其它化合物分离方面得到应用。
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