论文部分内容阅读
苹果树腐烂病是苹果枝干上的重大病害之一,近年来,苹果树腐烂病在我国主要苹果种植区迅速蔓延,危害程度逐年加重,影响了苹果产量和品质,严重阻碍了我国苹果产业的发展。目前关于该病的防治除了常规的果园管理,刮除病斑及抗病育种之外,还需要针对病原菌新的靶标位点,开发出抑制病原菌生长发育的新型杀菌剂,来控制病原菌在树体内的继续蔓延。因此,从基因层面揭示病原菌生长发育关键位点为病害防治提供了新的理论依据。本研究将借助实验室前期已经建立的苹果树腐烂病菌ATMT突变体库,对其中的233株菌株进行了系统的表型分析,筛选获得了一些与该病菌生长发育相关的突变体,并进一步对部分生长发育突变体的T-DNA插入位点的右侧翼序列进行了扩增和分析,实验结果如下:1.通过对野生型菌株03-8及233株供试突变体菌株进行菌落形态菌落大小的测定以及繁殖体产生情况的观察,筛选得到菌落颜色有变异的菌株25株(10.73%),菌落边缘变异为不规则类型的菌株18株(7.73%);菌落大小异常的菌株12株(5.15%),其中有4株生长显著减慢;有11株突变体的繁殖体最初形成时间延迟(4.72%),其中有1株推迟至40d左右出现繁殖体,10株推迟60d左右出现繁殖体,X7398在观测期(60d)内始终未见繁殖体的形成,经苹果树皮诱导培养基验证,确定为不产孢突变体菌株;5株突变体的繁殖体产生量比野生型菌株03-8多一倍以上,达到400个/皿以上,12株突变体的繁殖体产生量不足野生型菌株03-8的一半,繁殖体不足100个/皿。2.利用TAIL-PCR对23株致病突变体进行扩增后,得到了15条侧翼序列条带,其中,12条侧翼序列为未知功能序列,X7174和X693的侧翼序列基因注释结果为细胞色素氧化酶1(Cytochrome Oxidase1),X22的侧翼序列基因注释结果为交替氧化酶(Alternative Oxidase)。