本实验主要分为三个部分：一．离体猪胰腺钬激光消融作用参数的实验研究研究目的：探索不同能量、不同时间、不同作用频率下，钬激光消融离体猪胰腺的作用范围，从而建立关于钬激光的回归方程，为临床超声内镜引导下钬激光对胰腺肿瘤的消融治疗提供实验基础。研究方法：在钬激光的三个作用参数（能量、时间、频率）可取值的范围内，每个参数分别取5个数值，根据每个参数的不同组合设计随机化表，总组合数125，根据随机化表设定钬激光消融的参数，连续作用于125块离体猪胰腺，超声内镜下观察钬激光消融时的声像图变化，肉眼下测量消融范围并利用公式V=4/3πabc计算消融体的体积，行H&E染色观察钬激光消融后组织病理学变化。结果：钬激光消融离体猪胰腺时，超声内镜下观察钬激光消融时消融区域呈高回声，并随着时间的延长而逐渐增大；肉眼观消融体近似椭圆球体，中间为碳化，外层为灰白色坏死区域。频率是影响消融体范围的主要因素，其次是时间，再次是能量，且差异具有统计学意义，并建立一包含能量、时间及频率的线性回归方程。H&E染色显示消融灶内胰腺组织呈凝固性坏死表现。结论：钬激光作用于离体猪胰腺可产生明显的组织坏死，所建立的钬激光消融的回归方程可指导临床实践。二．超声内镜引导下钬激光对裸鼠胰腺原位种植瘤消融作用的实验研究研究目的：利用裸鼠胰腺原位种植瘤模型，探索线性回归方程的可行性和准确性和超声内镜引导下钬激光消融作用的安全性和有效性，为后续实验奠定基础。研究方法：首先建立裸鼠原位种植瘤模型：将人胰腺癌细胞株SW1990接种至20只4-6周龄的健康雄性BALB/c裸鼠的胰腺尾部的包膜上。将裸鼠随机平均分成2组，实验组裸鼠给予超声内镜引导下钬激光消融胰腺原位种植瘤，消融参数根据前期所得的线性回归方程进行设定，对照组裸鼠不给予任何干预，仅超声内镜下测量胰腺肿瘤的大小。治疗前与治疗后第7天，第14天和1月后于超声内镜下测量实验组及对照组裸鼠肿瘤的大小，观察精神状态、食欲、活动量及有无并发症等。1月后解剖裸鼠，取出肿瘤，行HE染色显微镜下观察胰腺肿瘤组织的病理变化。结果：所有裸鼠均可耐受超声内镜引导下钬激光的消融，实际消融范围与计算的消融范围相似。实验组裸鼠术后无明显不适反应，精神状态及食欲较好，对照组裸鼠精神状态逐渐恶化，身材极度消瘦。消融前实验组裸鼠肿瘤大小为559.39±165.91mm3，对照组肿瘤大小为426.99±174.37mm3。消融后一月实验组肿瘤减小，大小为159.93±66.84mm3，对照组肿瘤增大，大小为881.39±243.56mm3。两组肿瘤体积的变化差异具有统计学意义。H&E染色可见消融部位呈凝固性坏死。结论：线性回归方程相对可行准确。超声内镜引导下钬激光对裸鼠原位种植瘤的消融治疗是安全并且有效的，主要引起肿瘤组织的凝固性坏死。三．超声内镜引导下钬激光消融胰腺肿瘤后肿瘤组织中热休克蛋白70的表达趋势及意义研究目的：探讨钬激光消融后胰腺肿瘤组织中热休克蛋白70在交界区（肿瘤消融区与非消融区之间的区域）的表达特点及表达趋势，为热休克蛋白是否可作为临床中胰腺癌钬激光消融治疗后判断治疗效果及预后的指标奠定基础。研究方法：选取4-6周龄的雄性bal-bc裸鼠30只，构建裸鼠原位移植瘤模型，随机分配每6只一组，每组中随机选取5只行超声内镜引导下钬激光消融裸鼠原位种植瘤，每组余下的一只不做任何处理作为对照。消融后分别于下列5个时间点处死裸鼠：消融后即刻，第12小时，第1天，第2天和第7天。以H&E染色，免疫组化，Western Blot及RT-PCR等方法检测交界区HSP70的表达趋势。结果：所有实验组裸鼠均可耐受钬激光的消融。HE染色显示：钬激光对肿瘤组织的消融作用主要引起肿瘤组织的凝固性坏死，免疫组化结果显示：HSP70蛋白表达位于细胞浆，并且位于钬激光消融区与未消融区的交界区域，未消融胰腺肿瘤组织中仅见少量HSP70的表达，钬激光消融即刻（0天）可见交界区域即有棕色颗粒产生，消融后12h至消融后1天内显微镜下可见颗粒逐渐增多，颜色逐渐由浅棕色变为深棕色，随后逐渐下降，到第7天时可见交界区棕色颗粒又有增多现象，其差异具有统计学意义。Western Blot结果显示：HSP70在裸鼠原位肿瘤钬激光消融后即刻升高，12小时时达到高峰，随后逐渐下降，2天时将至最低，到第7天时又再次升高，但是未经钬激光处理的胰腺肿瘤仅表达少量的HSP70，比较差异有统计学意义。RT-PCR结果显示：HSP70消融后即刻升高，12小时达到高峰，随后逐渐下降，2天时将至最低，到第7天时复升，未经钬激光处理的裸鼠胰腺肿瘤中仅表达少量的HSP70，各组之间差异具有统计学意义。结论：超声内镜引导下钬激光消融能使裸鼠原位移植瘤组织坏死，并可引起HSP70的表达，HSP70的再度升高可增加消融细胞的免疫原性，对治疗效果及预后的判断均有指导意义。