论文部分内容阅读
目的三阴乳腺癌侵袭性强,淋巴结转移率高,五年复发率高,预后较差,缺乏相应治疗靶点。近年来沉默肿瘤特异性基因的表达或研发针对肿瘤特异性基因的药物,成为肿瘤基因治疗的新方向。衣被蛋白复合体-亚基β2(coatomer protein complex,subunie beta 2,beta prime,COPB2),在细胞内物质转运中发挥着重要作用。研究发现,COPB2基因在癌组织中高表达,沉默COPB2基因可致细胞周期阻滞、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。本实验的目的是研究COPB2对三阴乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其初步机制探讨。方法1.Western blotting检测非三阴乳腺癌MCF-7细胞和三阴乳腺癌HS-578T细胞中COPB2的表达;两种细胞上皮间质转化标志物表皮钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)的表达差异。2.MTT实验、克隆形成实验、Transwell实验检测非三阴乳腺癌MCF-7细胞和三阴乳腺癌HS-578T细胞增殖、迁移、侵袭能力的差异。3.COPB2基因的慢病毒特异性干扰载体sh-COPB2转染人三阴乳腺癌HS-578T细胞作为沉默组,同时设立空白对照组及阴性对照组,转染96h后,Western blotting实验检测沉默效率。4.MTT实验、克隆形成实验、Transwell实验检测沉默COPB2对HS-578T细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。5.Western blotting检测沉默COPB2后HS-578T细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白及p-AKT蛋白表达量的变化。6.Western blotting检测加入AKT激动剂SC79后,p-AKT、AKT、COPB2蛋白表达量的变化,Transwell实验检测加入AKT激动剂SC79后,HS-578T细胞迁移、侵袭能力的变化。结果1.三阴乳腺癌HS-578T细胞COPB2的表达量高于非三阴乳腺癌MCF-7细胞(P<0.05)。2.三阴乳腺癌HS-578T细胞的增殖、迁移、侵袭能力高于非三阴乳腺癌MCF-7细胞,MCF-7细胞的E-cadherin表达水平高于HS-578T细胞,HS-578T细胞的Vimentin、N-cadherin表达水平高于MCF-7细胞(P<0.05)。3.慢病毒特异性干扰载体sh-COPB2转染HS-578T细胞后,沉默效率大于80%。沉默COPB2后,与对照组相比,三阴乳腺癌HS-578T细胞增殖、迁移、侵袭能力降低(P<0.05)。4.沉默COPB2后,与对照组相比,三阴乳腺癌HS-578T细胞E-cadherin表达无明显变化(P>0.05),N-cadherin、Vimentin以及p-AKT蛋白的表达量明显下调(P<0.01)。5.沉默COPB2后,加入AKT激动剂SC79,细胞迁移、侵袭能力增强(P<0.01)。6.沉默COPB2后,加入AKT激动剂SC79,COPB2蛋白表达无明显变化。结论三阴乳腺癌HS-578T细胞的COPB2表达水平明显高于非三阴乳腺癌MCF-7细胞,且HS-578T细胞的增殖、侵袭、迁移能力强于MCF-7细胞,沉默COPB2可抑制HS-578T细胞增殖、迁移、侵袭。提示COPB2参与三阴乳腺癌的发生发展,其作用机制与上调p-AKT蛋白的表达有关。