论文部分内容阅读
研究目的:醋酸格拉默(Glatiramer acetate,GA)是一种具有免疫调节作用的药物,它已经被批准用于多发性硬化症(中枢神经系统脱髓鞘疾病)的一线治疗。但是,醋酸格拉默在治疗多发性硬化症中的免疫调节机制仍不完全清楚。虽然改善对髓鞘抗原,如中枢髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)的免疫反应可能是它的免疫调节机制,但是醋酸格拉默的免疫调节机制是否是抗原非特异性的仍不清楚。在本实验中,我们应用与中枢抗原MBP不同的周围神经抗原P0,诱导人类吉兰巴雷综合征的动物模型-实验性自身免疫性神经炎(Experimental autoimmune neuritis,EAN)作为工具,探索醋酸格拉默的免疫调节作用是否具有抗原非特异性。研究内容和方法:通过周围神经髓鞘抗原P0(Protein 0)免疫lewis大鼠的方法诱导实验性自身免疫性神经炎,在lewis鼠造模前和发病后分别皮下注射醋酸格拉默,观察动物的临床评分和体重变化。同时在发病高峰期即造模后第16天,通过肌电图评估坐骨神经髓鞘和轴索损伤;通过HE染色和Luxol Fast Blue病理染色观察髓鞘变化;通过酶联免疫法检测多种炎性细胞因子变化。体外实验通过H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法检测醋酸格拉默对不同抗原P0、MBP、LPS(Lipopolysaccharide)刺激的T细胞增殖。实验结果:免疫前或者免疫后10天皮下注射醋酸格拉默均减轻了该疾病的临床评分,同时醋酸格拉默治疗组大鼠的体重明显较对照组增加,具有显著的统计学差异。肌电图研究表明,治疗组坐骨神经远端运动潜伏期明显降低,运动传导速度明显增加,波幅明显增高,表明醋酸格拉默减轻了髓鞘和轴索损伤。神经病理HE和Luxol Fast Blue染色证实了免疫前注射醋酸格拉默减轻了P0诱导的EAN坐骨神经脱髓鞘。ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)结果表明在治疗组,炎性因子如Interferon-gama(INF-γ),IL-6,IL-12,,IL-17明显降低,IL-10明显升高,均具有统计学意义,进一步验证了醋酸格拉默对周围神经脱髓鞘疾病具有抑制炎症的作用。我们的体外实验通过H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法进一步证实了醋酸格拉默对周围神经抗原P0、中枢神经抗原MBP、非特异性抗原刺激的T细胞增殖均有抑制作用,治疗组和对照组有显著的统计学差异。结论:醋酸格拉默减轻了实验性自身免疫性神经炎造成的神经功能缺损,证明了该药物免疫调节机制不是中枢神经抗原特异性的。