生物柴油属于可再生能源,是优质的石油柴油代用品。许多微藻具备大量生产中性脂(三酰甘油)的能力,是很好的生物柴油来源,但目前人类对于多数微藻的生长方式、代谢途径等相关的研究并不多。从成本的角度考虑,适合大规模培养的优质藻种还未筛选到,培养技术还不成熟,因此利用微藻生产生物柴油至今尚未实现商业化。有文献报道ACP1(酰基载体蛋白)和RCA2(1,5-二磷酸核酮糖羧化酶活化酶)两个基因在植物中分别与油脂代谢和光合作用相关,但在莱茵衣藻中尚无相关报道。莱茵衣藻是一种单细胞真核绿藻,其基因组测序已全部完成,并成功实现了细胞核、叶绿体、线粒体基因组的遗传转化,是很好的模式物种,对我们深入了解微藻油脂代谢的调控机理有着重要的借鉴意义。本研究在本实验室已有的基础上,选择莱茵衣藻的ACP1和RCA2基因为研究对象,以细胞壁缺失、精氨酸依赖型莱茵衣藻为实验材料,首先通过一步法PCR构建2种针对ACP1和RCA2基因的amiRNA供体载体,通过接合转移技术(MAGIC)分别构建针对这2种基因的amiRNA表达载体,然后将这2种干扰表达载体分别转入莱茵衣藻细胞。实时荧光定量PCR的结果表明,amiRNA-ACP1和amiRNA-RCA2表达量高,ACP1和RCA2沉默效果显著。荧光分光光度法法测定相对脂含量变化的结果表明,两种基因的沉默均对莱茵衣藻油脂含量的积累产生影响,其中ACP1的影响尤为显著,表明其与莱茵衣藻油脂积累途径密切相关,有很大的发掘空间,为探寻通过分子生物途径提高微藻油脂产量的方法提供了理论依据。