目的:本论文的研究目的在于考察ACM对人肝癌细胞株SMMC-7721抗血管生成作用并初步探讨其潜在的机制,同时利用建立的人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤模型,进一步考察ACM体内抗血管生成作用以及其潜在机制。方法:(1)选用MTT法考察ACM对5株人肝癌细胞(Bel-7402、HepG2、Huh7、Hep3B和SMMC-7721细胞),人脐静脉内皮细胞HUVECs以及人胎肝细胞株L-02的增殖抑制作用。(2)通过克隆形成实验,考察ACM对HUVECs和SMMC-7721细胞克隆形成的影响。(3)采用划痕实验,Transwell迁移、侵袭实验,考察ACM对HUVECs和SMMC-7721细胞迁移、侵袭的影响。(4)采用HUVECs基质胶管腔形成实验,考察ACM对HUVECs管腔形成的影响。(5)采用大鼠主动脉环实验,考察ACM对大鼠主动脉环毛细血管生成的抑制作用。(6)采用免疫荧光实验,检测ACM对HUVECs和SMMC-7721细胞膜蛋白VEGFR2的磷酸化影响。(7)利用斑马鱼模型,考察ACM对斑马鱼胚胎节间血管生成的影响。(8)建立SMMC-7721裸鼠移植瘤模型,考察ACM体内抗肝癌血管生成的作用。(9)利用 Western blotting 法检测 ACM 对 HUVECs 和 SMMC-7721 细胞及SMMC-7721细胞移植瘤组织中血管生成相关蛋白表达的影响。结果:(1)MTT 实验结果表明,ACM 能抑制 Bel-7402、HepG2、Huh7、Hep3B、SMMC-7721、L-02 及 HUVECs 的增殖,且对 HUVECs 及 SMMC-7721 细胞的增殖抑制呈时间和剂量依赖性。(2)克隆形成实验表明,ACM能浓度依赖性地抑制HUVECs和SMMC-7721细胞克隆形成。(3)划痕实验和Transwell迁移实验的结果表明,ACM能明显抑制HUVECs和SMMC-7721细胞迁移;Transwell侵袭实验的结果表明,ACM能明显抑制HUVECs和SMMC-7721细胞侵袭,且随着ACM浓度的增大,抑制作用更加明显。(4)管腔形成实验结果显示ACM能明显抑制HUVECs管腔形成,且具有浓度依赖性。(5)大鼠主动脉环实验表明,ACM能抑制大鼠主动脉环毛细血管的生成。(6)免疫荧光实验结果表明,ACM能浓度依赖性地减少HUVECs和SMMC-7721细胞膜蛋白VEGFR2的磷酸化。(7)斑马鱼实验结果表明,ACM能浓度依赖性地抑制斑马鱼胚胎节间血管的生成。(8)SMMC-7721细胞移植裸鼠的实验结果显示:ACM能有效地抑制移植瘤的生长,对脏器指数无显著影响;免疫组化结果显示,ACM能下调瘤组织中CD31的表达;HE染色结果表明,ACM对裸鼠肝、肾无毒性作用,且能促进瘤组织坏死。(9)Western blotting实验结果显示,ACM能减少HUVECs和SMMC-7721细胞中VEGFR2、STAT3 的磷酸化,以及能减少PI3K/Akt/mTOR和Ras/Raf/MEK/ERK信号通路中相关蛋白的磷酸化;ACM能下调SMMC-7721细胞移植瘤组织中VEGFR2、CD31的表达,以及减少STAT3、Akt、ERK的磷酸化。结论:本文通过体内外实验证明,ACM能显著抑制肝癌血管的生成,其作用的机制可能是通过抑制VEGF/VEGFR2信号通路来实现的。