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目的:糖尿病是病因和发病机理尚未完全阐明的内分泌-代谢疾病,临床可分为多种类型。高血糖是其共同的主要标志。胰岛素分泌绝对和相对不足以及靶组织细胞对胰岛素的敏感性降低是引发糖尿病的基本环节。胰岛素作用不足使机体利用葡萄糖的能力降低,脂肪合成代谢减弱,脂肪动员和分解加速,血游离脂肪酸和甘油三酯浓度升高,体内大量脂肪酸被氧化代替葡萄糖供能,以满足机体对能量的需求。脂肪酸通过β氧化途径氧化供能。脂肪酸的β氧化是由线粒体和过氧化物酶体共同完成的。但它们的β氧化途径在反应的底物、产物、催化反应的酶等方面均有所不同。此外,啮齿类动物肝脏的过氧化物酶体还可被诱导增殖,β氧化途径中的酶活性也同时被诱导增加。这种增殖是通过过氧化物酶体增殖活化受体α(PPARα)介导实现的。研究表明,多种化学试剂如降脂药氯贝特及结构类似物,与氯贝特结构不同的降脂药Wy-14,643,以及脂肪酸及其代谢产物均可活化PPARα,导致啮齿类动物肝脏过氧化物酶体大量增殖,与脂肪酸β氧化途径有关的酶也同时被诱导增加。研究显示,氯贝特等药物诱导下增殖的大鼠肝脏过氧化物酶体,膜的多种性质如膜脂质、膜结合蛋白的组成及<WP=4>含量,膜流动性,膜通透性等都发生了改变。表明,增殖的过氧化物酶体与生理状态下的过氧化物酶体的结构不一样。糖尿病状态下,脂肪动员增加,脂肪酸β氧化加强,致使PPARα的天然配体脂肪酸及其代谢产物的量也增加,结果也导致了过氧化物酶体增殖,参与β氧化反应的酶的含量及活性也增加。这种糖尿病状态下增加的过氧化物酶体的膜性质是否也与正常过氧化物酶体不一样,未见文献报道。为此,我们用链脲佐菌素造成糖尿病大鼠模型,从膜的流动性和通透性两方面观察糖尿病状态下的生物膜的性质,揭示肝脏过氧化物酶体在糖尿病状态下的功能,以期从分子及细胞水平进一步探讨糖尿病状态下机体的脂代谢变化,深化对糖尿病的认识。方法:选用六周龄健康Sprague-Dawlay大鼠28只,雌雄各半,体重200-250g左右,随机分为性别相配的糖尿病组和正常对照组。糖尿病组一次性腹腔内注射链脲佐菌素诱导糖尿病发生。于糖尿病诱导成功后2周,两组大鼠取鼠尾静脉血用ONE TOUCH血糖分析仪测定血糖,颈动脉放血处死,取血液和肝脏。透射电子显微镜观察大鼠肝脏组织过氧化物酶体的形态,应用SYNCHRON LX20型全自动生化分析仪,免疫比浊法测定血清甘油三酯、胆固醇,酶法测定血清高密度脂蛋白。用一步低渗法制备红细胞膜,蔗糖浓度密度梯度离心法分离制备大鼠肝脏的过氧化物酶体、线粒体、微粒体,<WP=5>用1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)为荧光探剂,荧光偏振法测定红细胞膜及过氧化物酶体、线粒体、微粒体等细胞器的膜流动性。在去垢剂Triton X-100的干预下,通过测定漏出红细胞外的血红蛋白量占总血红蛋白量的百分比,测定红细胞的通透性;在Triton X-100及蔗糖的高渗干预下,通过测定渗漏出过氧化物酶体外的过氧化氢酶活性占总过氧化氢酶活性的百分比,测定过氧化物酶体的通透性。荧光法测定过氧化氢的生成量来反映过氧化物酶体软酯酰辅酶A氧化酶的活性,以每分钟催化产生1umol H2O2的软酯酰辅酶A氧化酶的量为1个酶活性单位(U),酶活性以每毫克样品蛋白所含酶的毫单位数(mU/mg样本蛋白)表示;分光光度法测定240nm下H2O2被过氧化氢酶分解的初速度,反映过氧化物酶体过氧化氢酶的活性,以每分钟催化1umol H2O2减少所需的过氧化氢酶的量作为一个活性单位(U),样本的酶活性以每毫克样本蛋白所含的酶活性单位(U/mg样本蛋白)表示。 结果:1糖尿病大鼠肝脏过氧化物酶体发生了增殖,并出现了形态学上的改变。透射电镜下,过氧化物酶体呈圆形或卵圆形,单位膜内包有中等电子致密度的细颗粒状基质,其中有结晶状核心,即核样体(晶样体)。与对照组相比,STZ处理组大鼠肝细胞中过氧化物酶体数量明显增多,单个过氧化物酶体体积增大。2糖尿病大鼠出现了异常的糖脂代谢<WP=6>糖尿病大鼠空腹血糖及血清甘油三酯明显高于正常对照组,血清高密度脂蛋白明显低于正常对照组,两组比较有显著性差异(p=4.84x10-12,p=8.53x10-7,p =0.019),血清胆固醇水平二者无明显差别(p =0.42)。表明:STZ诱导的糖尿病大鼠出现了类似人类糖尿病的异常糖脂代谢。3糖尿病大鼠红细胞膜流动性降低,通透性无明显改变糖尿病大鼠红细胞膜荧光偏振度P值,各向异性γ值,微黏度η值均明显高于正常对照组,两组比较有显著性差异(p=0.023,p=0.023,p=0.025)。表明:糖尿病大鼠红细胞膜流动性明显降低。但在相同浓度的Triton X-100作用下,比较红细胞中漏出的血红蛋白量与红细胞中总血红蛋白量的百分比,两组无明显差别(p=0.47, p=0.46, p=0.76),表明:红细胞膜的通透性两组相似。4糖尿病大鼠肝脏的线粒体、过氧化物酶体膜流动性升高,微粒体膜流动性无明显改变。糖尿病大鼠肝脏线粒体、过氧化物酶体膜荧光偏振度P值,各向异性γ值,微黏度η值明显低于正常对照组,两组比较有显著性差异(线粒体p=0.0037,p=0.0035, p=