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FoxM1c作为转录因子Fox家族成员之一,对正常细胞的增殖分裂具有重要的调控作用,但同时FoxM1的异常表达也能导致肿瘤细胞的发生与发展。许多研究已经证实,FoxM1在多种肿瘤细胞中持续高表达,而在正常静止状态或高度分化的细胞中基本不表达。因此为通过靶向FoxM1蛋白来治疗肿瘤提供了理论上的可行性,但是由于FoxM1转录因子的特性及其结构上缺乏疏水性结构,传统小分子化学药物很难靶向。因此传统药物学研究通常将转录因子排除在肿瘤治疗靶蛋白之外,但是随着生物技术的发展,多肽药物本身的优点克服了传统药物固有的缺陷,从而使得靶向FoxM1成为可能性。另外天然植物药中的许多成分具有抗肿瘤活性,因此使得其具有多靶点特性,这种特点与肿瘤多靶点治疗思想和方法相吻合。 本研究首先在本实验室前期利用噬菌体随机十二肽库筛选获得的高亲和多肽序列的基础上,通过MEME模体分析软件获得一条高亲和多肽序列共有的模体序列:WHLD。之后再将模体序列与穿膜肽结合并最终确定两条多肽序列CT-788.rrrrrrrrGSGSWHLD(r为D型精氨酸)和CT-789:WHLDGSGSWHLD。在合成之前,通过计算机分子对接软件Molegro.Virtual.Docker(MVD)模拟两条多肽与受体蛋白FoxM1c DNA结合区的相互作用。结果显示两条多肽分子均能与FoxM1cDNA结合区稳定结合。 在分子对接的基础上,我们合成了CT-788和CT-789两种多肽,并进行肿瘤细胞体外实验,用MTT法检测多肽分子对肿瘤细胞活力的影响,其中CT-788在浓度100μg/mL下对HEPG-2和MCF-7肿瘤细胞的抑制率分别为41.26%和34.26%,而相同浓度下CT-789对两种细胞的抑制率分别为15.96%和17.8%。 通过显微镜直接观察天然植物液处理过的肿瘤细胞形态学,可以清楚观察到天然植物液YN-01能显著抑制HEPG-2细胞的生长,并且在4%的低浓度(含50%的乙醇)下就能杀死肿瘤细胞。MTT实验数据也很好地说明了YN-01能够很好抑制HEPG-2细胞的活力,其4%的低浓度抑制率就高达68%。之后通过AO-EB细胞双染、电泳检测DNA ladder、Annexin V-FITC/PI标记流式细胞仪实验进一步证明了YN-01能够引起HEPG-2细胞的凋亡。最后,荧光定量PCR实验数据显示YN-01处理HEPG-224小时之后,FoxM1和p53的mRNA水平大幅上调,但48小时后其mRNA水平均大幅下调。抗凋亡基因Survivin和Bcl-2在48小时之后其mRNA水平也同样出现大幅下调的现象,因此根据文献研究以及上述数据可以进行推论,YN-01可能通过抑制FoxM1和p53基因的表达,从而抑制其下游的靶基因Survivin和Bcl-2的转录,来诱导肿瘤细胞进入凋亡途径。