在新药筛选中,以SPA 技术为基础的高通量筛选平台在国外已得到广泛的应用。本论文的目的是将SPA 技术应用于核受体与膜受体的高通量药物筛选。论文的主要内容包括:(1)利用杆状病毒表达系统表达全长核受体PPARγ。首先用分子生物学方法将PPARγ的全长基因亚克隆进质粒pFastBac1,将重组质粒pFastBac1-PPARγ转化到大肠杆菌DH10Bac,通过筛选得到重组杆粒。将后者转染昆虫Sf-9 细胞后获得重组病毒,Sf-9 细胞感染重组病毒后表达核受体PPARγ,与[3H]BRL49653 的结合实验表明所表达的PPARγ保持了生物学活性。(2)运用PPARγ、RXRα、[3H]BRL49653,biotin-PPRE 与SPA 微球建立了基于SPA 技术的PPARγ“ABCDE”高通量筛选模型,并对16000 个化合物样品进行了筛选, 12 个化合物被发现具有良好的结合活性,其中2 个样品的IC50值低于0.5 μM。(3)运用[3H]cytisine、α4β2-nAChR 和FlashBlue 微球,建立了基于SPA 技术的膜受体α4β2-nAChR“ABC”高通量筛选模型,并对32000 个化合物样品进行了筛选, 17 个化合物被发现具有良好的结合活性,其IC50 值均小于10 μM。结论:(1)利用杆状病毒表达系统成功表达了全长核受体PPARγ。(2)在国内首次将SPA 技术应用于新药筛选领域,建立相关的核受体“ABCDE”与膜受体“ABC”的高通量筛选模型,并运用于高通量药物筛选,发现了一批具有良好结合活性的小分子化合物。(3)与传统HA 筛选方法相比,SPA 技术在质量控制、可靠性和自动化等方面都具有优势。